序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過(guò)程，我們?yōu)槟扑]十篇生物技術(shù)的重要性范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來(lái)更深刻的閱讀感受。

篇（1）

作者：劉蓉 單位：克山縣古北鄉(xiāng)政府林業(yè)站

關(guān)于轉(zhuǎn)基因植物最主要的生態(tài)考慮之一就是與野生種群的基因交換的問(wèn)題，這一問(wèn)題在林業(yè)中早已有所注意，但還需要從農(nóng)業(yè)上對(duì)轉(zhuǎn)基因作物向野生種群的基因流的研究中借鑒經(jīng)驗(yàn)。在大多數(shù)情況下，轉(zhuǎn)基因植物的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)要小于引進(jìn)外來(lái)種的風(fēng)險(xiǎn)。引進(jìn)外來(lái)種等于向環(huán)境中釋放一個(gè)完全不同的遺傳結(jié)構(gòu)，而不是向本地種引進(jìn)一個(gè)單個(gè)基因。對(duì)于轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的釋放也必須采取謹(jǐn)慎態(tài)度，使經(jīng)濟(jì)損失的風(fēng)險(xiǎn)和生態(tài)損失的風(fēng)險(xiǎn)減到最小。因此，許多國(guó)家制定了規(guī)則和限制，規(guī)定在商業(yè)釋放之前必須要有區(qū)域田間試驗(yàn)。除草劑抗性。抗除草劑的楊樹(shù)可能是林木中發(fā)展最成熟的轉(zhuǎn)基因技術(shù)。人們首次關(guān)注抗除草劑的轉(zhuǎn)基因植物是因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)了雜草種群抗性增強(qiáng)的證據(jù)。林業(yè)中的風(fēng)險(xiǎn)可能要比農(nóng)業(yè)中的小，因?yàn)槌輨┲皇窃谠炝殖跗诙唐谑褂?，而在整個(gè)造林過(guò)程中總雜草的控制不是必需的，所以雜草抗性的選擇壓力就小得多。另一種擔(dān)心是轉(zhuǎn)基因樹(shù)木與野生種群的雜交。當(dāng)雜交發(fā)生時(shí)，對(duì)于野生種群來(lái)說(shuō)將很少有環(huán)境選擇的好處，除非鄰近的野生種群也被施用了除草劑，而這種情況在林業(yè)中很少發(fā)生。

開(kāi)花或育性的降低。林木開(kāi)花的減少可以使光合產(chǎn)物更多的用于木材生產(chǎn)，而不是用于生殖器官。但由于這種資源的再分配不是定量的，效果也不明顯，所以人們引入這種性狀的最主要的原因是它實(shí)際上減少了轉(zhuǎn)基因樹(shù)木與鄰近的同種種群之間的基因流。這將大大提高人們對(duì)在天然林附近密集種植轉(zhuǎn)基因樹(shù)林的接受能力。目前對(duì)開(kāi)花機(jī)制的研究正在進(jìn)行，育性基因長(zhǎng)期表達(dá)的穩(wěn)定性也還有待于在田間試驗(yàn)中加以證實(shí)?？瓜x(chóng)性?，F(xiàn)在抗蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因作物已經(jīng)是很普遍了，抗蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因林木也已出現(xiàn)。這些轉(zhuǎn)基因植物帶來(lái)了一系列需要探討的復(fù)的生態(tài)問(wèn)題。第一個(gè)需要關(guān)注的問(wèn)題是，作為生態(tài)環(huán)境中食物鏈的一環(huán)，它們產(chǎn)生的復(fù)合物可能具有的毒性；其次，是它們與野生親緣種雜交或使害蟲(chóng)種群積累抗性（類(lèi)似于除草劑抗性）時(shí)，它們對(duì)生態(tài)的影響。林業(yè)中另外一個(gè)嚴(yán)重的問(wèn)題是，樹(shù)木較長(zhǎng)的世代可能會(huì)使許多代的昆蟲(chóng)種群處于選擇壓力下，使其積累抗性。林業(yè)中目前發(fā)展最完善的抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，與在農(nóng)業(yè)中一樣，是應(yīng)用來(lái)自于天然昆蟲(chóng)病原體蘇云金桿菌的晶體蛋白基因。到目前為止已用B.t.cry基因轉(zhuǎn)化歐洲黑楊、歐洲落葉松等樹(shù)種，獲得了抗鱗翅目昆蟲(chóng)的轉(zhuǎn)基因植株。為了減少對(duì)種類(lèi)相對(duì)狹窄的B.t.毒蛋白的依賴(lài)，對(duì)于其它復(fù)合物的研究正在進(jìn)行中。由于抗蟲(chóng)轉(zhuǎn)基因樹(shù)木復(fù)雜的生態(tài)效應(yīng)和公眾的關(guān)注，還需要進(jìn)行深入的實(shí)驗(yàn)室及田間實(shí)驗(yàn)。

木材的化學(xué)性質(zhì)。目前，為了更容易和更環(huán)保地制造紙漿，而從遺傳上改變樹(shù)木木質(zhì)素的化學(xué)性質(zhì)，已有不少研究。通過(guò)改造木質(zhì)素合成途徑中的重要蛋白，可以在很幼小的樹(shù)中產(chǎn)生獨(dú)特的木材成分。也發(fā)現(xiàn)了一些對(duì)木材的化學(xué)性質(zhì)有較大影響的天然基因(如在火炬松中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)主要的隱性基因。木質(zhì)素化學(xué)性質(zhì)的改變，對(duì)環(huán)境沒(méi)有直接的威脅。但在發(fā)展木質(zhì)素改良品種的過(guò)程中，仍存在一個(gè)重要的問(wèn)題，這些經(jīng)過(guò)改造的木材是否會(huì)表現(xiàn)出對(duì)環(huán)境脅迫的敏感性。利用林業(yè)生物技術(shù)的公平性。當(dāng)前私人投資者在大多數(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域的投資處于領(lǐng)先地位，同時(shí)也承擔(dān)著相應(yīng)的經(jīng)濟(jì)風(fēng)險(xiǎn)。而這種投資風(fēng)險(xiǎn)大都是受專(zhuān)利保護(hù)的。因此，一個(gè)很明顯的問(wèn)題是，這些轉(zhuǎn)基因樹(shù)木資源將完全被某些私人公司控制。人們利用這些技術(shù)或材料將會(huì)因壟斷而變得非常昂貴。從而無(wú)法充分發(fā)揮他們的價(jià)值。在這一問(wèn)題上，政府應(yīng)該發(fā)揮更大的作用。首先，政府可以制定一系列規(guī)章制度，并起協(xié)調(diào)作用，最后使私人的公司和公立的研究所能夠共同享用和發(fā)展物流及信息流，而避免由私人的大公司所控制。其次，政府可以加大對(duì)公立科研單位發(fā)展生物技術(shù)的投資，從而打破私人公司的壟斷地位。林業(yè)生物技術(shù)還存在著國(guó)家之間發(fā)展不平衡的現(xiàn)象。在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，由于政府和私人公司的資金投入都很多，加之科學(xué)技術(shù)水平較高，林業(yè)生物技術(shù)發(fā)展很快，掌握著許多先進(jìn)技術(shù)；在廣大發(fā)展中國(guó)家，雖然林業(yè)生物技術(shù)有著廣闊的應(yīng)用前景，卻由于技術(shù)的落后和資金的缺乏，發(fā)展較慢。這需要加強(qiáng)國(guó)際間的技術(shù)交流與合作，科技界和政府間的交流都需要加強(qiáng)，以使生物技術(shù)為全球的林業(yè)生產(chǎn)做出更大的貢獻(xiàn)。

公眾對(duì)遺傳改良的接受能力公眾對(duì)轉(zhuǎn)基因植物的接受能力已成為現(xiàn)代生物技術(shù)能否推廣應(yīng)用所不可忽視的因素。由于轉(zhuǎn)基因植物是一個(gè)全新的技術(shù)產(chǎn)品，目前科學(xué)水平還不能準(zhǔn)確地回答它是否對(duì)人類(lèi)健康和生態(tài)環(huán)境有不良影響。所以世人對(duì)轉(zhuǎn)基因食品安全性的憂(yōu)慮，引發(fā)了世界范圍的廣泛爭(zhēng)論。由于大多數(shù)轉(zhuǎn)基因林木的產(chǎn)品主要是木材，而不是人類(lèi)的食品，人們對(duì)轉(zhuǎn)基因林木不象對(duì)轉(zhuǎn)基因食品那樣關(guān)注。轉(zhuǎn)基因林木至少不會(huì)對(duì)人類(lèi)健康產(chǎn)生直接的危害。但仍有許多公眾擔(dān)心轉(zhuǎn)基因樹(shù)木這種“非天然”的產(chǎn)品會(huì)對(duì)自然環(huán)境產(chǎn)生不利影響。因此，給公眾一個(gè)科學(xué)上可靠的、中性的和理智的信息，讓公眾能夠正確認(rèn)識(shí)轉(zhuǎn)基因林木，是十分必要的。這樣在轉(zhuǎn)基因林木向環(huán)境中釋放時(shí)可以避免許多麻煩。對(duì)于生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中所產(chǎn)生的問(wèn)題，應(yīng)根據(jù)具體情況認(rèn)真對(duì)待，使其在林業(yè)生產(chǎn)中更好的發(fā)揮作用。其在林業(yè)生產(chǎn)中更好的發(fā)揮作用。

篇（2）

一、前言

武術(shù)健身操是為充分發(fā)揮武術(shù)的教育和健身作用，豐富課間體育活動(dòng)內(nèi)容，教育部和國(guó)家體育總局共同創(chuàng)編了《全國(guó)中小學(xué)生系列武術(shù)健身操》。全國(guó)中小學(xué)生系列武術(shù)健身操以中國(guó)武術(shù)為主要內(nèi)容，以廣播體操為基本表現(xiàn)形貌，傳承武術(shù)和中國(guó)傳統(tǒng)文化，從而達(dá)到豐富中小學(xué)生課間操內(nèi)容，增強(qiáng)兒童和青少年身心健康為目的的體育鍛煉形式。在全國(guó)中小學(xué)中普及武術(shù)健身操，不僅有利于他們自身身心的發(fā)展，同時(shí)能使中華民族的傳統(tǒng)文化得以發(fā)揚(yáng)光大。

二、武術(shù)健身操發(fā)展的現(xiàn)狀及其特點(diǎn)

武術(shù)健身操自2010年9月1日起在全國(guó)普通中小學(xué)校、中等職業(yè)學(xué)校中推廣實(shí)施。這套全國(guó)中小學(xué)生系列武術(shù)健身操，共包括適宜小學(xué)生選練的《旭日東升》《雛鷹展翅》，適宜中小學(xué)生選練的《英雄少年》《功夫青春》四套武術(shù)健身操。在中小學(xué)中推廣普及武術(shù)健身操，不僅有利于他們自身身心健康的發(fā)展，更能借助高素質(zhì)的教師隊(duì)伍這一中介者的社會(huì)資源力量，使中華民族傳統(tǒng)文化發(fā)揚(yáng)光大。這四套操與廣播體操相比，有三個(gè)突出特點(diǎn)：

1.動(dòng)作不同于以橫平豎直為主的徒手體操動(dòng)作。武術(shù)健身操的動(dòng)作是選自武術(shù)運(yùn)動(dòng)的形態(tài)多樣，妙趣橫生，含有攻防作用的動(dòng)作。

2.練習(xí)方法不同于徒手體操，只有個(gè)人單練。武術(shù)健身操中還有通過(guò)喂招、拆招的形式進(jìn)行配對(duì)交手的對(duì)練方法。

3.武術(shù)健身操不僅具有與徒手體操共有的健身價(jià)值，還有練習(xí)自衛(wèi)能力、傳承民族文化、弘揚(yáng)民族精神的作用。

三、武術(shù)健身操可以提高中小學(xué)生的身心健康水平

隨著科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展和信息社會(huì)現(xiàn)代化的進(jìn)步，每個(gè)人都面臨著前所未有的機(jī)遇，同時(shí)，也承受著巨大的壓力。中小學(xué)生自然也要面對(duì)來(lái)自于社會(huì)適應(yīng)、學(xué)習(xí)障礙、考試焦慮等各個(gè)方面的壓力，這就使得許多學(xué)生或多或少地存在著生理和心理問(wèn)題。例如，肥胖、營(yíng)養(yǎng)不良、免疫力低下、體弱多病、網(wǎng)絡(luò)成癮、交際困難、厭學(xué)、自卑、悲觀(guān)等。中小學(xué)生同樣也不能避免這些問(wèn)題的存在。中小學(xué)生是我們祖國(guó)的花朵，是我們國(guó)家的棟梁。倘若將一些不良生活習(xí)慣帶到以后的生活、工作中去，對(duì)他們的將來(lái)是一個(gè)不可預(yù)知的隱患。因此，從健康角度出發(fā)，在中小學(xué)生中普及武術(shù)健身操意義重大。

1.學(xué)習(xí)武術(shù)健身操，促進(jìn)學(xué)生身體機(jī)能的發(fā)展

可增加骨質(zhì)密度，使骨頭變得更加堅(jiān)固，促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育，增強(qiáng)體質(zhì)。在練習(xí)中注意動(dòng)作與呼吸的正確配合，屈體動(dòng)作應(yīng)呼氣，挺身動(dòng)作應(yīng)吸氣。武術(shù)動(dòng)作對(duì)四肢能力度的鍛煉有較好的效果，并能增強(qiáng)關(guān)節(jié)的穩(wěn)固性和靈活性，技術(shù)特點(diǎn)有利于新陳代謝，長(zhǎng)期練習(xí)能增強(qiáng)人的免疫力。武術(shù)操練習(xí)中的雙方對(duì)招，既考驗(yàn)學(xué)生的頭腦靈活性，又改善全身肌肉的機(jī)能，達(dá)到強(qiáng)身健體的目的。

2.學(xué)習(xí)武術(shù)健身操，提高學(xué)生心理健康水平

練習(xí)武術(shù)健身操是集體活動(dòng)，學(xué)生聚在一起互相學(xué)習(xí)、切磋技藝、交流思想、擴(kuò)大交往、增加友誼。因此，可以改善學(xué)生身體表現(xiàn)和身體自尊，有效提高其自尊心和自信心。學(xué)生從小就養(yǎng)成獨(dú)立自主的生活習(xí)慣，遇到困難勇于克服，鍛煉出堅(jiān)韌不屈的戰(zhàn)斗意志，有利于學(xué)生意志品質(zhì)的培養(yǎng)。有個(gè)別學(xué)生膽小，不愛(ài)說(shuō)話(huà)，還有的學(xué)生體弱多病，通過(guò)練習(xí)武術(shù)健身操都有了明顯變化。進(jìn)而改善強(qiáng)迫、抑郁、焦慮、悲觀(guān)、敵對(duì)等心理，有效地促進(jìn)健康心理的形成，改善人際關(guān)系。

3.武術(shù)健身操的武德教育，可以端正人品，培養(yǎng)師德

“習(xí)武以德為先”體現(xiàn)了武德在武術(shù)文化方面的重要地位?！吧形涑绲隆钡木衽囵B(yǎng)習(xí)武者尊師重道、講禮守信、寬以待人、嚴(yán)于律己、高尚的道德情操。尤其在追求武藝提高的過(guò)程中，需要吃苦耐勞、堅(jiān)持不懈的精神，這不僅能培養(yǎng)學(xué)生堅(jiān)韌不拔、勇于進(jìn)取的品質(zhì)，也是一種學(xué)生修身養(yǎng)性的重要手段。在學(xué)習(xí)過(guò)程中，對(duì)學(xué)生進(jìn)行武德教育，端正學(xué)生的人品，進(jìn)而培養(yǎng)師德。接受傳統(tǒng)的武術(shù)文化教育，可以培養(yǎng)具有優(yōu)秀品格的學(xué)生。

4.學(xué)習(xí)武術(shù)健身操，幫助學(xué)生樹(shù)立科學(xué)的人生觀(guān)

學(xué)生在青春期，易沖動(dòng)，難以辨別是非，是人生觀(guān)、世界觀(guān)、價(jià)值觀(guān)發(fā)展的關(guān)鍵時(shí)刻。所以這個(gè)時(shí)候，培養(yǎng)學(xué)生的人生觀(guān)很重要。學(xué)生犯了錯(cuò)誤，教師的說(shuō)教，學(xué)生不容易接受，自尊心強(qiáng)，愛(ài)面子，損傷他們的自尊心。還會(huì)降低他們的積極性，逆反心理較強(qiáng)。練習(xí)武術(shù)健身操，教學(xué)生如何做人做事，做有正義感的人，培養(yǎng)學(xué)生健康的體魄和勇敢強(qiáng)大的內(nèi)心。

5.學(xué)習(xí)武術(shù)健身操對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響

中小學(xué)生的學(xué)習(xí)生活非常緊張，交感神經(jīng)往往處于興奮狀態(tài)。因此，學(xué)生容易產(chǎn)生疲勞現(xiàn)象，致使身心素質(zhì)下降。練習(xí)武術(shù)健身操，從根本上能減輕學(xué)生用腦過(guò)度、神經(jīng)過(guò)度緊張的程度，使腦部氣血充盈，保證了腦組織的供血充足，強(qiáng)健大腦。武術(shù)健身操的練習(xí)是在課間，學(xué)生進(jìn)行練習(xí)，正好可以緩解大腦疲勞，使頭腦清醒，改善與修復(fù)中樞神經(jīng)的功能，使大腦處于最佳的工作狀態(tài)，有利于提高學(xué)習(xí)效率。

四、中小學(xué)生應(yīng)該肩負(fù)起繼承并傳播優(yōu)秀的傳統(tǒng)文化

武術(shù)作為中華民族的傳統(tǒng)項(xiàng)目之一，是中國(guó)幾千年?duì)N爛文化的歷史產(chǎn)物，這是世界上其他國(guó)家不可能產(chǎn)生的獨(dú)特的傳統(tǒng)武術(shù)項(xiàng)目，武術(shù)不僅普及于國(guó)內(nèi)，而且廣泛傳播于世界各國(guó)。由于武術(shù)涉及中國(guó)傳統(tǒng)哲學(xué)、傳統(tǒng)養(yǎng)生學(xué)、傳統(tǒng)美學(xué)等多方面的領(lǐng)域，因而武術(shù)吸引了整個(gè)世界。作為炎黃子孫，應(yīng)該把祖國(guó)的寶貴遺產(chǎn)發(fā)揚(yáng)光大。中小學(xué)生對(duì)優(yōu)秀民族文化起到繼承和傳播的承上啟下的作用。武術(shù)健身操以廣播操為基本推廣形式，通過(guò)武術(shù)健身操，掌握武術(shù)的基本技術(shù)和健身方法，更應(yīng)該把它看成修身養(yǎng)性的傳統(tǒng)體育的傳承。

五、中小學(xué)生應(yīng)該接受武術(shù)文化思想教育，弘揚(yáng)民族精神

武術(shù)獨(dú)特的文化內(nèi)涵、顯著的養(yǎng)生功能，得到了現(xiàn)代技術(shù)的肯定和認(rèn)同，被許多外國(guó)人推崇和練習(xí)，我們中國(guó)的武術(shù)被老外稱(chēng)為“中國(guó)功夫”。然而，在我國(guó)，隨著人們對(duì)健康重視程度的加強(qiáng)，健身操、瑜伽、跆拳道這些成了熱門(mén)的健身方式。而具有民族傳統(tǒng)文化的武術(shù)的影響范圍卻日益縮小。練習(xí)武術(shù)的人大多數(shù)為體育院系的大學(xué)生，以及小部分選修武術(shù)課的大學(xué)生。而更多的中小學(xué)生沒(méi)機(jī)會(huì)了解和學(xué)習(xí)武術(shù)，實(shí)為遺憾。究其原因，一方面是中小學(xué)生只注重文化課的學(xué)習(xí)，沒(méi)有開(kāi)展武術(shù)課程，把體育鍛煉放到了次要地位。另一方面，當(dāng)今青少年追求時(shí)尚，缺失民族自豪感和責(zé)任感。

學(xué)習(xí)武術(shù)健身操、演練武術(shù)健身操、傳播健身操的過(guò)程，就是接受武術(shù)思想教育、弘揚(yáng)民族精神的過(guò)程。因此，在全國(guó)中小學(xué)生中普及武術(shù)健身操具有重要的價(jià)值和特殊的意義。

六、結(jié)論

1.武術(shù)健身操具有良好的健身效果，對(duì)中小學(xué)生改善心理狀態(tài)、塑造完美性格、培養(yǎng)高尚情操、磨煉堅(jiān)強(qiáng)意志有著獨(dú)特的魅力。

2.武術(shù)健身操蘊(yùn)含著豐富的中國(guó)傳統(tǒng)文化思想，對(duì)弘揚(yáng)民族傳統(tǒng)文化有著積極作用。

3.學(xué)校是傳播文化的重要場(chǎng)所，作為學(xué)生應(yīng)該擔(dān)負(fù)起繼承和傳播中華民族傳統(tǒng)文化的歷史使命。不論是從增強(qiáng)中小學(xué)生的身心健康還是繼承和傳播民族文化，弘揚(yáng)民族文化的角度來(lái)看，在全國(guó)中小學(xué)生中普及武術(shù)健身操是非常有必要的。

參考文獻(xiàn)：

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篇（3）

[收稿日期] 2014-03-18

[基金項(xiàng)目] 國(guó)家自然科學(xué)基金青年基金項(xiàng)目（30902003）

[通信作者] 呂愛(ài)平，Tel：（010）64067611，F(xiàn)ax：（010）84032881，E-mail：

[作者簡(jiǎn)介] 姜淼，副研究員，從事中藥藥性分類(lèi)研究、中醫(yī)證候分類(lèi)研究、中西醫(yī)結(jié)合臨床基礎(chǔ)研究工作，Tel：（010）64014411-2397，E-mail：

1 中藥寒熱藥性研究的重要性及學(xué)科發(fā)展趨向

中藥藥性理論作為中藥理論體系的基礎(chǔ)與核心，是中藥學(xué)最重要的學(xué)術(shù)特征，也是中藥區(qū)別于其他植物類(lèi)藥物的關(guān)鍵，其科學(xué)基礎(chǔ)的發(fā)現(xiàn)是中藥現(xiàn)代化發(fā)展的先決條件[1-2]。然而，由于藥性理論的特殊性和復(fù)雜性，其研究已成為制約中藥現(xiàn)代化、國(guó)際化發(fā)展的重要瓶頸[3-4]。寒熱藥性作為中藥性能的核心要素，是目前藥性研究的主要切入點(diǎn)，在藥性理論中具有基礎(chǔ)與核心地位。目前這一領(lǐng)域較為公認(rèn)的問(wèn)題可以概括成3個(gè)方面：①寒熱藥性科學(xué)內(nèi)涵的現(xiàn)代科技語(yǔ)言詮釋、表征；②寒熱藥性評(píng)價(jià)方法/指標(biāo)體系的構(gòu)建；③現(xiàn)代中藥寒熱藥性理論構(gòu)建及臨床應(yīng)用[1]。3個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題之中，前2個(gè)問(wèn)題緊密關(guān)聯(lián)、互為基礎(chǔ)，只有在對(duì)寒熱藥性的科學(xué)內(nèi)涵做出科學(xué)詮釋的基礎(chǔ)上，才可能構(gòu)建其評(píng)價(jià)方法和指標(biāo)體系；構(gòu)建了科學(xué)準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)方法與指標(biāo)體系，對(duì)于寒熱藥性的科學(xué)內(nèi)涵詮釋也提供了依據(jù)和思路，二者共為現(xiàn)代寒熱藥性理論構(gòu)建及指導(dǎo)臨床應(yīng)用的前提。

因而，在當(dāng)前科研體系下，基于傳統(tǒng)藥性的哲學(xué)認(rèn)知，建立科學(xué)、可靠的寒熱藥性分類(lèi)模型，是解決寒熱藥性諸多關(guān)鍵問(wèn)題的重要命題和必要的切入點(diǎn)，不僅能夠推進(jìn)藥性理論自身發(fā)展，還能夠用于厘清藥性混淆品種的寒熱屬性從而更好指導(dǎo)其應(yīng)用、擴(kuò)展藥性理論應(yīng)用范疇為中藥引入其他植物藥新資源，豐富中藥學(xué)科內(nèi)容，因而具有深遠(yuǎn)而重大的意義。

2 基于物質(zhì)基礎(chǔ)研究藥物寒熱屬性分類(lèi)研究面對(duì)的挑戰(zhàn)

從物質(zhì)基礎(chǔ)討論中藥寒熱屬性的思路一直受到研究者們的重視，從化學(xué)成分入手尋找中藥四性物質(zhì)基礎(chǔ)的方法在20世紀(jì)末即成為研究熱點(diǎn)，研究方法包括化學(xué)分析[5]、文本挖掘[6]、實(shí)驗(yàn)研究等多種手段[7-9]；也有學(xué)者提出將化學(xué)成分概念與系統(tǒng)觀(guān)點(diǎn)整合研究的框架[10]或方法[11]。然而受限于中藥成分的復(fù)雜性，大部分結(jié)論難以避免局限性和片面性[12]。作者所在項(xiàng)目組應(yīng)用化學(xué)生物學(xué)技術(shù)，構(gòu)建了基于藥物所含成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)片段譜的寒熱屬性分類(lèi)模型，分類(lèi)準(zhǔn)確性在驗(yàn)證集中可達(dá)90%，高于目前世界上現(xiàn)有的應(yīng)用化學(xué)結(jié)構(gòu)判定藥物寒熱屬性的最好報(bào)道（81%）[13]。由于模型是基于現(xiàn)有的分子化學(xué)片段結(jié)構(gòu)全集構(gòu)建，較好避免了僅針對(duì)某一或某幾種主要化學(xué)成分研究帶來(lái)的片面性問(wèn)題；然而仍然存在2個(gè)問(wèn)題限制了模型的擴(kuò)展應(yīng)用：首先，化學(xué)結(jié)構(gòu)譜的模型是定性而非定量化的模型，無(wú)法解決痕量成分帶來(lái)較大生物學(xué)效應(yīng)等特殊量效關(guān)系情況；第二，分類(lèi)準(zhǔn)確性受限于對(duì)目標(biāo)藥物化學(xué)成分信息的收集全面程度，如果某一藥物的化學(xué)成分信息缺失或不準(zhǔn)確，分類(lèi)結(jié)果將受到較大影響。同時(shí)，越來(lái)越多的研究者認(rèn)識(shí)到，藥物寒熱屬性作為藥物作用于機(jī)體后效應(yīng)表達(dá)的一種高度概括，必然與藥物的生物效應(yīng)緊密相關(guān)；因而從生物效應(yīng)角度區(qū)分中藥寒熱屬性，是寒熱藥性分類(lèi)模型構(gòu)建的最重要的、也是必經(jīng)的方向。

3 從生物學(xué)效應(yīng)角度研究寒熱屬性分類(lèi)的必要性

近年來(lái)，在中醫(yī)藥“系統(tǒng)觀(guān)”、“整體觀(guān)”思想的指引下，多位中藥研究者將生物熱力學(xué)[14-15]、數(shù)據(jù)挖掘[16-17]、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[18-20]、化學(xué)物質(zhì)組學(xué)[10]等現(xiàn)代科技和理念引入藥性理論研究，取得了階段性成果。例如創(chuàng)新性地開(kāi)發(fā)冷熱板示差法應(yīng)用于寒熱藥性研究，能夠客觀(guān)真實(shí)地反映藥物甚至復(fù)方寒熱藥性的差異，且與傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論對(duì)應(yīng)[1， 14-15]。基于這些研究，多個(gè)中藥研究?jī)?yōu)勢(shì)團(tuán)隊(duì)在學(xué)科交叉融合的基礎(chǔ)上，提出了寒熱藥性理論研究的基本假說(shuō)：“藥性是中藥的特征組分作用于機(jī)體的共性靶標(biāo)而產(chǎn)生的生物效應(yīng)的高度概括；藥性功效科學(xué)內(nèi)涵可以通過(guò)共性效應(yīng)（群）-共性靶標(biāo)（群）-特征組分（群）加以表征”[1]。指出藥性的主要元素包括3個(gè)方面[21]，除了物質(zhì)基礎(chǔ)，還包括生物效應(yīng)、網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)，生物學(xué)效應(yīng)在藥性判定中的作用受到更高度的重視[22]。

然而，單純基于某方面功能的藥性研究，取得過(guò)一些可觀(guān)的成果，如發(fā)現(xiàn)寒熱藥性與大腦不同部位單胺類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)的關(guān)系[23]、與抑制脂肪酸合成酶能力關(guān)系[24]、與線(xiàn)粒體能量代謝關(guān)系[25]等；但因結(jié)論多局限于所涉及的個(gè)別藥物，忽視藥性構(gòu)成因素間的整體聯(lián)系，難以進(jìn)行客觀(guān)化的生物學(xué)表征，缺乏能夠推論于其他藥物的原理性結(jié)果，結(jié)論不具有普適性，不能從理論層面對(duì)于藥性原理做出解釋?zhuān)矡o(wú)法滿(mǎn)足當(dāng)前“系統(tǒng)醫(yī)學(xué)”、“整體醫(yī)學(xué)”、“網(wǎng)絡(luò)醫(yī)學(xué)”理念下的藥物寒熱屬性生物學(xué)效應(yīng)系統(tǒng)化表征的要求。因而，融合現(xiàn)代多學(xué)科方法構(gòu)建中藥藥性?xún)?nèi)涵的合理表征方法，揭示藥性的“效應(yīng)、物質(zhì)、靶標(biāo)”三要素現(xiàn)代科學(xué)本質(zhì)，是當(dāng)前寒熱藥性研究中的緊迫任務(wù)與重中之重。

4 基于生物學(xué)效應(yīng)的藥物寒熱屬性分類(lèi)研究策略

4.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)背景下的藥物寒熱屬性分類(lèi)研究 隨著各種高通量組學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展、可處理數(shù)據(jù)量的幾何級(jí)數(shù)式增加、計(jì)算方法與能力的迅猛突破，現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)研究也進(jìn)入了“信息時(shí)代”，為研究者提供了全面、系統(tǒng)地探索疾病、證候、療效、預(yù)后等復(fù)雜命題的契機(jī)[18]。研究技術(shù)的進(jìn)步必然引發(fā)研究策略的升級(jí)，系統(tǒng)生物學(xué)技術(shù)的產(chǎn)生，和被認(rèn)為是“下一代藥物研究模式”的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)[26]概念的出現(xiàn)，使得從生物學(xué)效應(yīng)角度為切入點(diǎn)、全面分析中藥寒熱屬性的差異機(jī)制成為可能[27]。其優(yōu)勢(shì)在于能夠用系統(tǒng)與網(wǎng)絡(luò)的思維來(lái)理解中藥寒熱屬性體系中整體生物學(xué)效應(yīng)的復(fù)雜性，使得從“小尺度”的分子層面闡釋“大尺度”的抽象藥性概念成為可能，從而能夠發(fā)揮寒熱藥性理論的特色、拓展其應(yīng)用范疇，通過(guò)對(duì)其他植物藥賦予寒熱屬性從而將其擴(kuò)展納入到中藥領(lǐng)域，豐富中藥資源。因而，如何將中藥藥性理論研究與網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法有機(jī)結(jié)合，應(yīng)用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法構(gòu)建中藥寒熱屬性的分類(lèi)模型，是目前藥性研究中最值得“挑戰(zhàn)”的問(wèn)題。

4.2 各種“組學(xué)”技術(shù)支持下的中藥寒/熱性矢量藥理網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與分析 應(yīng)用生物網(wǎng)絡(luò)、藥理網(wǎng)絡(luò)分析技術(shù)開(kāi)展中醫(yī)證候、中藥方劑復(fù)雜體系研究工作，已有一系列探索取得了令人關(guān)注的成果[18]，目前已建立了基于網(wǎng)絡(luò)大規(guī)模預(yù)測(cè)致病基因、藥物靶標(biāo)的方法[28-29]；融合基因表達(dá)譜芯片與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)的生物分子網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建方法[30-32]；以及在網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)計(jì)算框架下評(píng)價(jià)藥物功能的方法[28]、識(shí)別生物分子網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵環(huán)節(jié)等方法[33]，在方劑配伍規(guī)律、發(fā)現(xiàn)藥效物質(zhì)、中醫(yī)方劑-證候關(guān)聯(lián)機(jī)制等方面均有成功的實(shí)踐應(yīng)用[34-35]。特別是通過(guò)寒、熱證候生物分子網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建，發(fā)現(xiàn)寒熱方劑對(duì)寒熱證患者的治療作用的生物學(xué)基礎(chǔ)在于逆轉(zhuǎn)神經(jīng)內(nèi)分泌免疫分子介導(dǎo)的能量代謝、免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)失衡，即調(diào)控集體物質(zhì)流-能量流-信息轉(zhuǎn)換流（代謝）平衡[28]，為揭示寒熱證候內(nèi)在機(jī)制提供了重要依據(jù)，也為寒熱藥性的研究提供了有力的參考和技術(shù)基礎(chǔ)。

然而，藥物的寒熱屬性研究不同于一般的病、證、方劑研究，具有其特殊性。首先，寒熱藥性的概念作為大尺度概念，具有高度概括性和抽象性，在臨床上與證對(duì)應(yīng)，而不局限于某個(gè)病種，也不針對(duì)某種特殊的體質(zhì)，這導(dǎo)致了臨床試驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究設(shè)計(jì)的難度。同時(shí)，脫離了“疾病”概念的單純證候網(wǎng)絡(luò)也是難以構(gòu)建的，因而從藥-證網(wǎng)絡(luò)對(duì)應(yīng)關(guān)系角度來(lái)解析藥性機(jī)制難以實(shí)現(xiàn)；而局限于某種疾病來(lái)對(duì)藥性進(jìn)行研究，又難以得出具有普適性的結(jié)論。其次，寒與熱在理論中具有對(duì)立統(tǒng)一的哲學(xué)關(guān)系，這一關(guān)系投射到分子網(wǎng)絡(luò)中，造成二者緊密關(guān)聯(lián)、難以區(qū)分的結(jié)果，本項(xiàng)目組依托前一個(gè)自然科學(xué)基金項(xiàng)目，全面收集文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，根據(jù)所選典型寒、熱性藥物的成分所對(duì)應(yīng)的活性靶蛋白，構(gòu)建了典型寒、熱性中藥的藥理網(wǎng)絡(luò)，并且進(jìn)行了網(wǎng)絡(luò)分析，結(jié)果表明寒性藥物和熱性藥物共享大部分靶標(biāo)分子，僅有相對(duì)很小部分特異性分子靶標(biāo)，表明單純依據(jù)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，沒(méi)有具體的寒、熱藥物作用的方向性和強(qiáng)度信息，很難區(qū)分藥物的寒、熱屬性。

因而，寒性藥物和熱性藥物具有傳統(tǒng)意義上“相反”的生物學(xué)效應(yīng)，卻又具有絕大部分共同的分子靶標(biāo)，這一現(xiàn)象提示，在寒、熱性藥物的藥理網(wǎng)絡(luò)中加入藥物的作用方向和作用強(qiáng)度信息，構(gòu)建定性定量的矢量性藥理網(wǎng)絡(luò)，是以網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)技術(shù)判定藥物寒熱屬性分類(lèi)的研究的關(guān)鍵步驟，而近年來(lái)廣泛應(yīng)用的“組學(xué)”技術(shù)正可以為這一關(guān)鍵步驟提供技術(shù)方法。

代謝組學(xué)（metabonomics）是20 世紀(jì)90 年代中期發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新興學(xué)科，是一種研究生物體系中代謝物組的技術(shù)和方法，強(qiáng)調(diào)把生物體作為一個(gè)完整系統(tǒng)來(lái)研究，通過(guò)測(cè)定代謝物組成變化，來(lái)認(rèn)識(shí)和反映生物體代謝網(wǎng)絡(luò)在疾病和藥物作用下的變化規(guī)律。代謝組學(xué)能用反映整體的代謝物圖直接刻畫(huà)出動(dòng)態(tài)情況下的生理和生化狀態(tài)及變化過(guò)程[36]，與中醫(yī)學(xué)的整體觀(guān)、動(dòng)態(tài)觀(guān)一致，適于復(fù)雜的中醫(yī)藥系統(tǒng)研究[37-38]。蛋白質(zhì)組學(xué)（蛋白芯片）[39]技術(shù)的研究對(duì)象是蛋白質(zhì)，其原理是對(duì)固相載體進(jìn)行特殊的化學(xué)處理，再將已知的蛋白分子產(chǎn)物固定其上，根據(jù)這些生物分子的特性，捕獲能與之特異性結(jié)合的待測(cè)蛋白，可為獲得重要生命信息（如某蛋白組分在體內(nèi)表達(dá)水平生物學(xué)功能、與其他分子的相互調(diào)控關(guān)系等）提供有力的技術(shù)支持，且具有高通量的驗(yàn)證能力，可以定量研究。有效運(yùn)用代謝組學(xué)與蛋白質(zhì)組學(xué)檢測(cè)技術(shù)，從整體、動(dòng)態(tài)角度評(píng)價(jià)機(jī)體在特定藥物干預(yù)下的狀態(tài)，定性定量提取網(wǎng)絡(luò)靶標(biāo)擾動(dòng)的方向、強(qiáng)度信息，可以為構(gòu)建寒、熱性藥物的矢量藥理網(wǎng)絡(luò)提供關(guān)鍵信息。

4.3 多學(xué)科背景下的藥物寒熱屬性分類(lèi)模型構(gòu)建 通過(guò)矢量藥理網(wǎng)絡(luò)分析方法發(fā)現(xiàn)寒、熱性藥物的生物效應(yīng)差異后，還需要對(duì)這些高維度的復(fù)雜數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，構(gòu)建能夠直接應(yīng)用的、具有實(shí)用性的模型工具，使研究成果便于應(yīng)用推廣，才能達(dá)到應(yīng)用模型厘清藥性混淆品種的寒熱屬性、甚至將藥性理論擴(kuò)展應(yīng)用于其他種類(lèi)藥物而擴(kuò)展中藥學(xué)資源的目標(biāo)。

模式識(shí)別屬于人工智能范疇，發(fā)展于20世紀(jì)50年代初期，是一個(gè)涉及多領(lǐng)域的交叉學(xué)科，包括統(tǒng)計(jì)學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)、信號(hào)處理、心理學(xué)和生理學(xué)等等，已廣泛應(yīng)用于自然科學(xué)和社會(huì)科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域[40]。其研究?jī)?nèi)容主要集中在2個(gè)方面：生物體是如何感知對(duì)象的，以及如何用計(jì)算機(jī)實(shí)現(xiàn)給定任務(wù)下的模式識(shí)別的理論和方法。模式識(shí)別問(wèn)題是面向多維數(shù)據(jù)的、按照數(shù)據(jù)表達(dá)的特征將其分類(lèi)的理論[41]，通過(guò)對(duì)具體事物進(jìn)行觀(guān)測(cè)得到的有時(shí)間和空間分布的信息，模式所屬的類(lèi)別或同一類(lèi)模式的總體稱(chēng)為模式類(lèi)（或簡(jiǎn)稱(chēng)為類(lèi)）。“模式識(shí)別”是在某些一定量度或觀(guān)測(cè)基礎(chǔ)上把待測(cè)模式分到各自的模式類(lèi)中去，其技術(shù)在醫(yī)藥領(lǐng)域已經(jīng)有過(guò)諸多成功應(yīng)用的范例。

模式識(shí)別中公認(rèn)最好4種的分類(lèi)方法包括模板匹配法、統(tǒng)計(jì)模式識(shí)別、句法或結(jié)構(gòu)模式識(shí)別和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)[42-43]?；诂F(xiàn)代生物信息學(xué)證據(jù)的中藥寒熱屬性模式識(shí)別過(guò)程屬于從中藥的現(xiàn)代生物信息學(xué)研究范式空間（包括生物活性靶蛋白、生物活性通道等參數(shù)）向其傳統(tǒng)藥性研究范式空間（寒熱屬性）的映射，其本質(zhì)上屬于對(duì)事物或現(xiàn)象的不同認(rèn)識(shí)角度之間的映射。因而，選擇模式識(shí)別技術(shù)，對(duì)于復(fù)雜的數(shù)百維生物學(xué)效應(yīng)參數(shù)進(jìn)行處理，建立算法，建立這些參數(shù)與寒熱屬性范式空間之間的映射，是使基于矢量藥理網(wǎng)絡(luò)分類(lèi)中藥寒熱屬性的研究成果得到更大限度便捷性、實(shí)用性與可推廣性的優(yōu)化選擇。

5 小結(jié)

綜上，藥物寒熱屬性是作為藥物的特征成分作用于機(jī)體的共性靶標(biāo)而產(chǎn)生的生物效應(yīng)的高度概括，寒與熱具有對(duì)立統(tǒng)一的特征規(guī)律，共享大部分生物靶標(biāo)而生物效應(yīng)呈現(xiàn)相反的方向；這種性能特點(diǎn)，可以通過(guò)定性定量的矢量藥理網(wǎng)絡(luò)分析來(lái)進(jìn)行區(qū)分，并應(yīng)用現(xiàn)代人工智能技術(shù)構(gòu)建相關(guān)模型，達(dá)到應(yīng)用生物效應(yīng)參數(shù)識(shí)別藥物寒熱屬性的目的，從而厘清藥性混淆品種的寒熱屬性，有望為藥物寒熱屬性的判定提供科學(xué)方法，也為拓展中藥新資源提供策略；同時(shí)也將豐富中藥理論，推進(jìn)藥性理論應(yīng)用范疇和現(xiàn)代化進(jìn)程。

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A cold/heat property classification strategy based on

bio-effects of herbal medicines

JIANG Miao， LV Ai-ping

（Institute of Basic Research In Clinical Medicine， China Academy of Traditional Chinese Medicine， Beijing 100700， China）

篇（4）

[Abstract]The study of single component in the multicomponent environment is one of the basic researches for biopharmaceutics classification system of Chinese materia medica （CMMBCS） That is to say， the classification research shall be based on the respective lift of solubility and permeability in the multicomponent environment， besides solubility and intestinal permeability of the single component We chose berberine as the main research object to investigate the changes of its solubility and intestinal permeability in Huanglian decoction Shakeflask and HPLC were used to detect the solubility of berberine in different pH buffer solutions and different concentrations of Huanglian decoction In situ singlepass intestinal perfusion （SPIP） and intestinal perfusion with venous sampling （IPVS） were carried out to study berberine′s intestinal absorption and absorption into blood， respectively

[Key words]Coptidis Rhizoma； berberine； solubility； intestinal permeability； biopharmaceutics classification system of Chinese materia medica

doi：10.4268/cjcmm20160706

口服藥物的水溶解性及腸滲透性是影響其胃腸道吸收的2個(gè)重要參數(shù)。生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)（BCS）據(jù)此對(duì)藥物進(jìn)行科學(xué)分類(lèi)，確定藥物吸收過(guò)程中的限速過(guò)程，針對(duì)此進(jìn)行合理的設(shè)計(jì)以獲得安全、有效的藥品[12]。目前BCS仍然在不斷地完善和發(fā)展，也衍生出了其他以不同側(cè)重點(diǎn)進(jìn)行研究的分類(lèi)系統(tǒng)[46]。但BCS針對(duì)的是單一成分的化學(xué)藥品，對(duì)于中藥多成分復(fù)雜體系而言并不適用，結(jié)合中藥自身特點(diǎn)與生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)，本課題組提出了中藥生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)（biopharmaceutics classification system of Chinese materia medica，CMMBCS）[7]?；凇岸喑煞謱哟尾町惐容^法”的理論指導(dǎo)，課題組前期研究了模擬多成分環(huán)境對(duì)葛根素（葛根芩連方中君藥主要成分）的溶解性及滲透性的影響[89]，本研究旨在探究單一成分在藥材水煎液這一真實(shí)的多成分環(huán)境中的BCS屬性變化規(guī)律。黃連為葛根芩連方中的臣藥，具有抗菌、抗病毒、降血脂、降血糖等藥理作用[1011]，小檗堿為其主要活性成分，與黃連堿、巴馬汀及藥根堿的含量約占黃連總生物堿的95%，其中小檗堿約占50% [12]。因此，本研究選擇小檗堿為主要研究對(duì)象，探究其在黃連水煎液中的水溶解性及腸滲透性變化規(guī)律，以豐富中藥生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)的研究，并為其進(jìn)一步發(fā)展提供數(shù)據(jù)支持及研究基礎(chǔ)。

1 材料

11儀器

LC20AT高效液相色譜儀（SPD20A型紫外檢測(cè)器，SIL20A自動(dòng)進(jìn)樣器，日本島津公司）；BT25S電子分析天平（北京賽多利斯儀器有限公司）；DZKW4電熱恒溫水浴鍋（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）；KH7200DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；STARTER 2100實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)（奧豪斯儀器上海有限公司）；蠕動(dòng)泵（BT1001F，保定蘭格恒流泵有限公司）；注射泵（LSP021B，保定蘭格恒流泵有限公司）；高速冷凍離心機(jī)（SIGMA，德國(guó)）。

12藥物與試劑

鹽酸小檗堿對(duì)照品（批號(hào)110713201212，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；鹽酸小檗堿原料（批號(hào)130808，陜西中鑫生物技術(shù)有限公司）；乙腈（色譜級(jí)，美國(guó)Fisher公司）；黃連飲片購(gòu)于北京同仁堂藥店。水合氯醛、氯化鈉注射液、磷酸、氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、葡萄糖、三乙胺、碳酸氫鈉、氯化鈣（AR，北京化工廠(chǎng)）；純凈水（娃哈哈集團(tuán)公司）。

13動(dòng)物

SD大鼠，雄性，體重200～250 g，北京維通利華試驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)SCXK（京）20140004。

2方法

21供試液的配制

KrebsRinger′s營(yíng)養(yǎng)液（KR液）：稱(chēng)取NaCl 780 g，KCl 035 g，CaCl2 037 g，NaHCO3 137 g，NaH2PO4 032 g，MgCl2002 g，葡萄糖140 g，加蒸餾水定容至1 L，調(diào)節(jié)pH到739～741，放置備用。

黃連水煎液的制備：取適量黃連藥材加10倍量水，常溫浸泡30 min，煎煮保持微沸30 min，趁熱濾過(guò)；藥渣加8倍量的水煎煮保持微沸30 min，趁熱抽濾，合并2次濾液，濃縮，冷至常溫，加水定容得黃連水煎液，相當(dāng)于生藥質(zhì)量濃度60 g?L-1，備用。

灌流液制備：取黃連水煎液用KR液稀釋至生藥質(zhì)量濃度為3，12，30 g?L-1灌流液。

22不同pH緩沖液的配制

pH 10鹽酸溶液：量取鹽酸溶液9 mL，加水稀釋至1 L，調(diào)節(jié)pH至10，即得。pH 25緩沖液：取磷酸二氫鉀100 g，加水800 mL，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至25，用水稀釋至1 L，調(diào)節(jié)pH至25，即得。pH 40緩沖液：取一水枸櫞酸1290 g，磷酸氫二鈉2725 g，加水1 L溶解，調(diào)節(jié)pH至40，即得。pH 68緩沖液：取磷酸二氫鉀170 g和磷酸氫二鉀178 g，加水溶解稀釋至1 L，調(diào)節(jié)pH至68，即得。pH 70緩沖液：取02 mol ?L-1磷酸二氫鉀溶液250 mL和02 mol ?L-1氫氧化鈉溶液1455 mL混合，加水稀釋至1 L，調(diào)節(jié)pH至70，即得。pH 74緩沖液：取磷酸二氫鉀681 g，加01 mol ?L-1氫氧化鈉溶液395 mL稀釋至1 L，調(diào)節(jié)pH至74，即得。

23鹽酸小檗堿含量測(cè)定方法

231色譜條件采用Luna C18色譜柱（46 mm×250 mm，5 μm，Phenomenex，USA），檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm，流速10 mL?min-1，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量20 μL，流動(dòng)相水（04%磷酸，08%三乙胺）乙腈，梯度洗脫（0～11 min，87∶13～87∶13；11～12 min，87∶13～83∶17；12～17 min，83∶17～83∶17；17～26 min，83∶17～76∶24；26～385 min，76∶24～71∶29；385～45 min，71∶29～68∶32；45～65 min，68∶32～32∶68；65～75 min，32∶68～87∶13）。

232標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備精密量取小檗堿對(duì)照品貯備液（10 g?L-1）配制質(zhì)量濃度分別為0200 4，0400 8，2004，1002，2004，4008，8016，12024 mg?L-1的對(duì)照品溶液，精密取上述對(duì)照品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，以藥物質(zhì)量濃度C（mg?L-1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸。

233精密度試驗(yàn)取含藥灌流液于1 d內(nèi)HPLC重復(fù)測(cè)定6次，測(cè)定峰面積。

234穩(wěn)定性試驗(yàn)含藥灌流液于0，2，4，6，12，24 h取樣檢測(cè)，測(cè)定峰面積。

235回收率考察精密吸取高、中、低3個(gè)濃度含藥灌流液，每個(gè)濃度平行3份，各精密加入對(duì)照品灌流液，測(cè)定峰面積，以測(cè)得濃度與實(shí)際濃度做比較計(jì)算方法回收率。

24鹽酸小檗堿在不同環(huán)境中溶解度的測(cè)定

241鹽酸小檗堿在不同pH緩沖液中溶解度的測(cè)定稱(chēng)取待測(cè)小檗堿原料藥適量，置25 mL具塞試管中，加入不同pH緩沖液10 mL，37 ℃水浴加熱，每隔5 min振搖30 s，觀(guān)察30 min，直至待測(cè)物不再溶解，得到飽和溶液。取出室溫靜置10 min后，過(guò)045 μm微孔濾膜過(guò)濾，得續(xù)濾液。加入相應(yīng)的緩沖液稀釋至一定濃度，搖勻過(guò)濾，高效液相色譜法測(cè)定其平衡溶解度。

242黃連水煎液中鹽酸小檗堿在pH 74緩沖液中溶解度的測(cè)定分別取不同生藥質(zhì)量濃度（3，12，30 g?L-1，調(diào)pH至74）的黃連水煎液各10 mL，置25 mL具塞試管中，加入小檗堿原料藥200 mg，（37±1） ℃水浴加熱，每隔5 min振搖30 s，觀(guān)察30 min，直至待測(cè)物不再溶解，得到飽和溶液。室溫條件下靜置10 min，過(guò)045 μm微孔濾膜過(guò)濾，得續(xù)濾液，分別加入pH 74緩沖液稀釋至一定濃度，高效液相色譜法測(cè)定其平衡溶解度。

25大鼠在體腸吸收實(shí)驗(yàn)方法

251大鼠在體單向腸灌流實(shí)驗(yàn)大鼠禁食不禁水18 h，稱(chēng)重，10%水合氯醛麻醉，沿腹中線(xiàn)剪開(kāi)腹部3～4 cm，分離實(shí)驗(yàn)用腸段，各腸段取約10 cm，腸段進(jìn)口端與注射泵相連，用預(yù)熱至37 ℃的生理鹽水以5 mL?min-1的速度對(duì)所取腸道進(jìn)行沖洗。流速調(diào)為02 mL?min-1灌流藥液，約30 min后吸收達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。開(kāi)始計(jì)時(shí)，用已知質(zhì)量的小瓶在出口處每隔15 min收集一次，計(jì)算收集前后小瓶質(zhì)量稱(chēng)量差，同時(shí)測(cè)定收集液的密度，以此方法對(duì)灌流液的體積校正。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死大鼠并剪下被灌流的腸段，測(cè)量其長(zhǎng)度和內(nèi)徑。按231項(xiàng)下色譜條件測(cè)定不同時(shí)間段流出藥液中鹽酸小檗堿含量。

252大鼠腸道灌流并行采血實(shí)驗(yàn)大鼠禁食不禁水18 h，腹腔注射10%水合氯醛麻醉，右側(cè)頸靜脈插管連接到蠕動(dòng)泵進(jìn)行供血。打開(kāi)腹部，選取腸段，用37 ℃的生理鹽水沖洗干凈，結(jié)扎實(shí)驗(yàn)用腸段以外的血管。對(duì)所取灌流腸段對(duì)應(yīng)的腸系膜靜脈插管，并連接到蠕動(dòng)泵，收集腸系膜靜脈流出血液。腸段進(jìn)口端與注射泵相連，將注射泵流速調(diào)為02 mL?min-1，灌流藥液，約30 min后吸收達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)。開(kāi)始計(jì)時(shí)收集流出的藥液和血液。每隔15 min更換腸液和血液的收集管。采用質(zhì)量法進(jìn)行水分校正。試驗(yàn)結(jié)束后，用生理鹽水沖洗腸段，將所用腸段剪下，測(cè)量其長(zhǎng)度和內(nèi)徑，并處死大鼠。所取血液樣品3 500 r?min-1離心15 min，取上層血漿，加入3倍量的甲醇沉淀蛋白，渦旋2 min，1萬(wàn) r?min-1離心15 min，取上清液定容至5 mL，經(jīng)045 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)；灌流液樣品經(jīng)045 μm的微孔濾膜過(guò)濾，注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

253數(shù)據(jù)分析[13]在體大鼠單向灌流中采用重量法校正水分吸收，計(jì)算有效滲透系數(shù)Peff、腸吸收速率常數(shù)Ka和腸吸收分?jǐn)?shù)Fa。

Peff=-Qin?ln[Cout（cor）/Cin]2πrL

Ka=（1-Cout（cor）Cin）QinV

Fa=（1-Cout（cor）Cin）×100%

Cout（cor）=CoutQoutQin

Qout=Mout/Doutt

式中Qin是灌流液流速（mL?min-1），L是灌流腸段長(zhǎng)度（cm）；r是灌流腸段半徑（cm）；Cin是灌流液中鹽酸小檗堿初始質(zhì)量濃度（mg?L-1）；Cout（cor）是經(jīng)重量法校正后的灌流收集液中鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度（mg?L-1）；V=πr2L是灌流腸道體積（mL）；Qout是通過(guò)灌流液流出的速度（mL?min-1）；Cout是灌流收集液中鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度（mg?L-1）；Mout是灌流收集液質(zhì)量（g），Dout是灌流收集液密度（g?mL-1），t是取樣周期（min）。

腸道灌流并行采血實(shí)驗(yàn)采用重量法校正水分吸收，計(jì)算有效滲透系數(shù)Pblood。

Pblood=ΔMB/Δt2πrL?

=Cout（cor）-C0ln[Cout（cor）/C0]

式中ΔMB/Δt是血液樣品中鹽酸小檗堿物質(zhì)的量（μg?sec-1）；是灌流腸段內(nèi)鹽酸小檗堿對(duì)數(shù)平均質(zhì)量濃度（mg?L-1）；L是灌流腸段長(zhǎng)度（cm）；r是灌流腸段半徑（cm）；Cout（cor）是鹽酸小檗堿校正后灌流收集液質(zhì)量濃度（mg?L-1），C0是鹽酸小檗堿初始灌流液質(zhì)量濃度（mg?L-1）。

3結(jié)果

31藥物濃度的測(cè)定

分別取空白灌流液、對(duì)照品溶液、含藥灌流液、空白血漿及含藥血漿進(jìn)行液相檢測(cè)，考察該色譜條件下空白灌流液及空白血漿對(duì)樣品含量測(cè)定的干擾。結(jié)果見(jiàn)圖1，空白灌流液及空白血漿在231項(xiàng)下色譜條件對(duì)藥物測(cè)定無(wú)干擾，說(shuō)明該方法專(zhuān)屬性良好。鹽酸小檗堿的線(xiàn)性回歸方程為Y=95 717X-8 5529，R2=0999 1，結(jié)果表明，小檗堿在0200 4～12024 mg?L-1線(xiàn)性關(guān)系良好。本方法測(cè)定的精密度及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD均小于10%。加樣回收率9987%～1029%，RSD均小于50%。

322黃連水煎液中小檗堿的溶解度小檗堿在不同質(zhì)量濃度黃連水煎液（生藥質(zhì)量濃度為3，12，30 g?L-1）中的溶解度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。小檗堿溶解度隨著黃連生藥濃度的增大而增大，在中、高濃度時(shí)比單一小檗堿溶解度要高。在低濃度時(shí)溶解度較單一成分比減小，推測(cè)黃連水煎液中可能存在某些成分在低濃度時(shí)對(duì)小檗堿的溶解度為抑制作用，高濃度時(shí)為促進(jìn)作用。

33鹽酸小檗堿在不同環(huán)境中的滲透性測(cè)定

331小檗堿單體在不同的濃度和腸段中吸收參數(shù)不同質(zhì)量濃度小檗堿灌流液（40，80，120 mg?L-1）在各個(gè)腸段間的吸收參數(shù)見(jiàn)表2。小檗堿在不同腸段單灌流的滲透系數(shù)Peff均

332黃連水煎液中小檗堿在不同的濃度和腸段中吸收參數(shù)根據(jù)小檗堿在體單向灌流實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇大鼠空腸段進(jìn)行不同濃度的黃連水煎液的在體單向灌流實(shí)驗(yàn)及腸道血管并行采血實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。黃連水煎液（3 g?L-1）中小檗堿質(zhì)量濃度與小檗堿單一成分（80 mg?L-1）質(zhì)量濃度相當(dāng)時(shí)，黃連水煎液中小檗堿的腸吸收參數(shù)Peff和Ka均顯著增加（P

4討論

鑒于生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)的科學(xué)性及實(shí)用性，F(xiàn)DA，EMA及WHO將其引入到指導(dǎo)原則中進(jìn)行藥物生物等效性豁免的評(píng)價(jià)研究，但是其在中藥相關(guān)領(lǐng)域的研究甚少。中藥的多成分及多成分的體內(nèi)相互作用等使得分類(lèi)研究十分困難，有研究[15]對(duì)中藥中已明確的化學(xué)成分對(duì)照品進(jìn)行臨時(shí)的生物藥劑學(xué)分類(lèi)，為確保藥品的質(zhì)量提供有力的保證，但該研究并未真正將中藥的多成分環(huán)境納入到分類(lèi)研究的考慮之中。中藥的本質(zhì)屬性為多成分之間共同作用發(fā)揮療效，中藥中的成分均處于受其他各種成分構(gòu)成的多成分環(huán)境的影響中，成分之間的影響可能會(huì)使得中藥成分乃至中藥整體的水溶解性與腸滲透性發(fā)生變化，而這種變化是可測(cè)的。

本研究中由小檗堿單一成分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，其溶解性和滲透性均較低，為BCS第Ⅳ類(lèi)藥物，依據(jù)CMMBCS分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，初步定為CMMBCSⅣ類(lèi)，即自身溶解性和滲透性均較差的藥物。而黃連水煎液中小檗堿的BCS屬性溶解性和滲透性相比較于單一小檗堿有所不同。小檗堿的溶解度隨著黃連水煎液生藥濃度的增加而增大，表明了藥材濃度的增大有利于小檗堿溶解度的增加。在體單向腸灌流實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示黃連水煎液中小檗堿的吸收速率隨著生藥濃度的增加而增大，也表明小檗堿存在被動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。且黃連水煎液中小檗堿能通過(guò)腸壁吸收進(jìn)入血液，從高濃度黃連水煎液的Pblood結(jié)果看出，吸收入血量明顯增大，且發(fā)生了數(shù)量級(jí)的變化。黃連水煎液（3 g?L-1）中小檗堿的滲透性大于小檗堿單一成分（80 mg?L-1），吸收入血的滲透性也大于小檗堿單一成分。說(shuō)明小檗堿在單個(gè)藥材中比單一成分更有利于其吸收。雖然黃連水煎液中小檗堿溶解性和滲透性有所改變，但提升不高，初步定為自身于溶解性和滲透性差且在單個(gè)藥材環(huán)境下提升不高的CMMBCSⅣ類(lèi)。

對(duì)于中藥生物藥劑學(xué)分類(lèi)系統(tǒng)研究而言，需要從單一成分研究上升到中藥多成分甚至中藥整體研究，本研究則以小檗堿單一成分的水溶解性及腸滲透性為研究基礎(chǔ)，進(jìn)一步研究了其在中藥多成分環(huán)境中的變化規(guī)律。但對(duì)整體研究而言，不僅化學(xué)成分眾多，而且所含大部分成分的藥理作用也未能一一闡釋清楚，除此之外，大多數(shù)中藥在使用過(guò)程中用量并不十分明確，對(duì)中藥整體進(jìn)行生物藥劑學(xué)分類(lèi)需考慮其他成分對(duì)每一成分的影響。

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篇（5）

目的 探討中藥骨疏康、西藥羥膦酸鈉、VK、碳酸鈣+VD對(duì)動(dòng)物股骨骨密度和血清鈣、磷堿性磷酸酶水平的影響，確定各種藥物治療動(dòng)物骨質(zhì)疏松的效果。方法 以去卵巢法復(fù)制動(dòng)物骨質(zhì)疏松模型，以骨疏康、羥膦酸鈉、VK、碳酸鈣+VD進(jìn)行治療，飼養(yǎng)15 w后在腹主動(dòng)脈采血，以日本產(chǎn)T107AHITACHI自動(dòng)生化分析儀測(cè)量各組大鼠血清堿性磷酸酶、血磷、血鈣指標(biāo)。之后處死大鼠，取大鼠股骨，采用中國(guó)原子能科學(xué)院生產(chǎn)的BMD400型單光子骨密度儀測(cè)量股骨骨密度。結(jié)果 模型組骨密度低于正常對(duì)照組、骨疏康組、羥膦酸鈉組、VK組（P

【關(guān)鍵詞】 骨質(zhì)疏松；骨密度；血鈣；血磷

以往的研究多為研究正常人或正常動(dòng)物及骨質(zhì)疏松(OP)動(dòng)物模型；或以單一藥物治療OP動(dòng)物模型，檢測(cè)骨密度與血清生化指標(biāo)〔1～7〕。以多種藥物治療OP動(dòng)物模型，檢測(cè)骨密度與血清中鈣、磷、堿性磷酸酶(ALP)極少報(bào)道。鑒于此，作者以去卵巢法復(fù)制OP動(dòng)物模型，以骨疏康、羥膦酸鈉、維生素(V)K、鈣劑防治OP，檢測(cè)動(dòng)物骨骼的骨密度及血清中鈣、磷、ALP指標(biāo)，旨在探討各種藥物的治療結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用體重為180～200 g，12月齡的SD大鼠60只，均為雌性，由長(zhǎng)春高新醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。許可證號(hào)：scxk(吉)200300040。

1.2 藥品

羥膦酸鈉（邦得林，成都化學(xué)制藥廠(chǎng)出品），中成藥骨疏康（遼寧東港制藥廠(chǎng)生產(chǎn)）。碳酸鈣+VD（法國(guó)伊諾岱國(guó)際醫(yī)藥公司出品），VK(天津藥業(yè)集團(tuán)出品)。

1.3 動(dòng)物分組與模型制作

將60只大鼠隨機(jī)分成6組，組間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P

1.4 儀器設(shè)備

中國(guó)原子能科學(xué)院生產(chǎn)的BMD400型單光子骨密度儀。日本產(chǎn)T107AHTACHI自動(dòng)生化分析儀。

1.5 各組大鼠骨密度測(cè)量

實(shí)驗(yàn)前從冰箱中取出各組大鼠股骨試樣，常溫下解凍后，取各組大鼠股骨各10個(gè)試樣，以中國(guó)原子能科學(xué)院生產(chǎn)的BMD400型單光子骨密度儀對(duì)各組大鼠股骨粗隆進(jìn)行骨密度測(cè)量。

1.6 各組大鼠血清鈣、磷、ALP測(cè)試

取各組大鼠各10個(gè)血清樣本以日本產(chǎn)T107AHTACHI自動(dòng)生化分析儀自動(dòng)采樣化驗(yàn)ALP、血磷、血鈣含量，計(jì)算機(jī)自動(dòng)打印數(shù)據(jù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS11.0軟件完成統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料以x±s表示，采用完全隨機(jī)分組單因素方差分析及t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

模型組血鈣低于正常對(duì)照組、骨疏康組、羥膦酸鈉組、VK組，與碳酸鈣+VD組差異不顯著，骨疏康組與正常組對(duì)照組差異不顯著。血磷測(cè)量結(jié)果表明，模型組血磷高于正常對(duì)照組、骨疏康組、VK組與碳酸鈣+VD組差異不顯著。模型組大鼠ALP高于正常對(duì)照組、骨疏康組、羥膦酸鈉組、VK組，與碳酸鈣+VD組差異不顯著，骨疏康組與正常組對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）。大鼠脛骨骨密度低于正常對(duì)照組、骨疏康組、羥磷酸鈉組和VK組，與碳酸鈣+VD組差異不顯著。見(jiàn)表1。表1 各組大鼠股骨骨密度、血鈣、血磷及ALP水平變化(略)

3 討論

血清總鈣和離子鈣測(cè)定對(duì)骨礦代謝和鈣磷代謝的研究有很重要價(jià)值。本研究提示骨疏康，羥膦酸鈉、VK有提高OP動(dòng)物模型血鈣的作用，骨疏康效果最好。學(xué)者們研究過(guò)實(shí)驗(yàn)性低磷攝入或磷吸收不良導(dǎo)致的銅缺乏對(duì)骨質(zhì)的影響，早已發(fā)現(xiàn)人工配制的低磷膳食可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物磷缺乏，進(jìn)而導(dǎo)致骨丟失〔8〕。在天然食物中，磷的分布廣且含量高，動(dòng)物一般不存在磷缺乏，高磷攝入是OP的危險(xiǎn)因素，高磷攝入通常是相對(duì)于鈣攝入而言，鈣供應(yīng)不足，磷供應(yīng)過(guò)量，低鈣高磷，其影響更嚴(yán)重。有學(xué)者用不同種屬的動(dòng)物觀(guān)察了高磷攝入對(duì)骨質(zhì)的不良影響，研究表明，高磷攝入可導(dǎo)致高磷血癥、低鈣血癥、骨丟失和軟組織鈣化等〔9〕。本研究提示雌性動(dòng)物OP血磷提高，骨疏康、羥膦酸鈉、VK均具有降低OP動(dòng)物模型血磷的作用，骨疏康效果最好。

ALP是參與骨代謝的重要蛋白質(zhì)，在發(fā)育中的骨組織內(nèi)含量豐富。兒童的ALP高于成人。ALP通過(guò)分解磷酸酯的無(wú)機(jī)磷，增加其局部濃度，以促進(jìn)基質(zhì)礦化，磷酸酶缺乏癥病人有嚴(yán)重的骨軟化癥，是先天性缺陷所致，這些病人血及尿中的焦磷酸鹽水平明顯升高，以骨再建增強(qiáng)為特點(diǎn)的全身和局部骨病變使ALP水平升高。骨形成與ALP的活性高度相關(guān)，并與骨鈣素亦高度相關(guān)，因此ALP和骨鈣素都是反映成骨細(xì)胞活動(dòng)增加的重要標(biāo)志。在高骨轉(zhuǎn)換率的OP、原發(fā)性甲狀旁腺功能亢進(jìn)、畸形性骨炎、骨軟化癥等患者ALP均增高〔10〕。本研究提示OP動(dòng)物模型血液ALP增高，具有高骨轉(zhuǎn)換率的OP的特征。骨疏康、羥膦酸鈉、VK具有降低OP模型動(dòng)物血液ALP的作用，碳酸鈣+VD效果不明顯。

骨密度的測(cè)定是反映OP程度，預(yù)測(cè)骨折危險(xiǎn)性的重要依據(jù)。除可診斷OP外，尚可用于臨床藥效觀(guān)察和流行病學(xué)調(diào)查。骨密度測(cè)量無(wú)創(chuàng)傷，易操作、價(jià)格低廉，是一種診斷和治療觀(guān)察等的好方法〔7〕。本研究結(jié)果提示骨疏康、羥膦酸鈉、VK治療OP具有一定的作用，骨疏康的作用最好。

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篇（6）

[中圖分類(lèi)號(hào)]Q813.1[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455(2010)03-0341-04

Effects of alcohol extractant from self-made traditional Chinese drug on expressions of typeⅠcollagen, matrix metalloproteinase 1 and vascular endothelial growth factor in keloid-derived fibroblasts

ZHAO Qing-li,MENG Ru-song,YANG Qing-qi,CAI Rui-kang

(Department of Dermatology,Air Force General Hospital of Chinese PLA,Beijing 100036,China)

Abstract:ObjectiveTo study the effects of the alcohol extractant from the self-made traditional Chinese drug on the expressions of typeⅠcollagen, matrix metalloproteinase 1 and vascular endothelial growth factor in keloid-derived fibroblasts(KFB).MethodsThe alcohol extractant from the self-made traditional Chinese drug at concentration of 500μg/ml was added to the cultured KFB. Immunohistochemistry was applied to detect the expressions of typeⅠcollagen, matrix metallo- proteinases 1 and vascular endothelial growth factor in KFB.ResultsAfter the extractant from drug taking action, the expression of type collagenⅠwas suppressed, the expression of MMP-1 was enhanced while the expression of VEGF was increased or decreased.ConclusionsThe self-made traditional Chinese drug may produce therapeutic effects by influencing the synthesis of typeⅠcollagen, MMP-1 and VEGF.

Key words:keloid, traditional Chinese drug; fibroblast, typeⅠcollagen; matrix metalloproteinase 1;vascular endothelial growth factor

瘢痕疙瘩(Keloid, K)的組織病理學(xué)特征為真皮中膠原纖維致密增生、排列紊亂。研究表明,K形成與膠原蛋白的合成與降解失衡有關(guān);K組織中的微血管狀況影響著K的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸。Ⅰ型膠原蛋白是K膠原組織中的主要成分,基質(zhì)金屬蛋白酶1(Matrix Metalloproteinases 1, MMP-1)是降解Ⅰ型膠原蛋白的關(guān)鍵酶。血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Vascular Endothelial Growth Factor, VEGF)為血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性絲裂原,在血管的形成、發(fā)育、分化等方面發(fā)揮著重要作用。本研究檢測(cè)自制中藥醇提物對(duì)K成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白、MMP-1及VEGF表達(dá)的影響,其目的是探討藥物的作用機(jī)制,為K臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1材料和方法

1.1 材料:自制中藥由全蝎、蚤休、丹參、生乳香、浙貝母、生甘草組成。體外培養(yǎng)的人K成纖維細(xì)胞(Keloid Fibroblasts, KFB)6株、人正常皮膚成纖維細(xì)胞(Normal Fibroblasts, NFB)3株由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院整形外科醫(yī)院王春梅教授贈(zèng)送。主要試劑及儀器包括兔抗人Ⅰ型膠原蛋白、MMP-1、VEGF多克隆抗體(武漢博士德公司)、二步法免疫組化檢測(cè)試劑(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)、DMEM、新鮮小牛血清、正常羊血清、正常兔血清。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥物制備:90g自制中藥粉碎為細(xì)粉,加8倍量75%乙醇回流提取,濾過(guò),濃縮,用乙醇溶解為100ml,密閉冷藏。量取適量的自制中藥醇提物水浴蒸干,加二甲基亞砜及PBS溶解,微孔濾膜濾過(guò)除菌,用細(xì)胞培養(yǎng)液(含DMEM、新鮮小牛血清、青霉素、鏈霉素)稀釋成實(shí)驗(yàn)濃度。

1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)及免疫細(xì)胞化學(xué)染色:根據(jù)增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇對(duì)成纖維細(xì)胞增殖無(wú)顯著抑制作用的藥物濃度(500 μg/ml)。KFB、NFB傳代3～7代,加0.25%胰蛋白酶消化,制成1.5×105/ml細(xì)胞懸液,以2ml/孔(3×105細(xì)胞/孔)加入內(nèi)含消毒蓋玻片的6孔板中,培養(yǎng)箱中孵育48h。吸除原培養(yǎng)液,中藥組加自制中藥醇提物培養(yǎng)液2ml于KFB孔中,陰性對(duì)照組加單純培養(yǎng)液2ml于KFB孔及NFB孔中,繼續(xù)孵育48h。取出蓋玻片,冷丙酮固定,1:15正常羊血清作用30min,分別滴加兔抗人Ⅰ型膠原蛋白(1:50)、MMP-1(1:100)、VEGF(1:50)多克隆抗體,同時(shí)設(shè)PBS對(duì)照及正常兔血清對(duì)照。4oC濕盒中過(guò)夜,復(fù)溫,滴加通用型IgG(Fab段)-HRP多聚體,37℃作用30min,DAB顯色,復(fù)染,脫水,封片。取硬皮病、惡性黑素細(xì)胞瘤、子宮內(nèi)膜石蠟切片各1份,分別進(jìn)行Ⅰ型膠原蛋白、MMP-1、VEGF免疫組化染色,以此設(shè)為陽(yáng)性對(duì)照。

1.2.3 結(jié)果判定:顯微鏡下觀(guān)察到Ⅰ型膠原蛋白、MMP-1、VEGF陽(yáng)性表達(dá)呈棕褐色,細(xì)胞漿和/或細(xì)胞核內(nèi)含棕褐色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野(×400)中細(xì)胞總數(shù)及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),并換算成陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:將所有資料輸入數(shù)據(jù)庫(kù),采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,檢測(cè)指標(biāo)用x±s表示,統(tǒng)計(jì)分析方法為t檢驗(yàn)。P

2結(jié)果

硬皮病真皮網(wǎng)狀層可見(jiàn)Ⅰ型膠原蛋白呈片狀棕褐色著色。惡性黑色素瘤胞漿、核質(zhì)中見(jiàn)MMP-1呈顆粒狀棕褐色著色。子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞胞漿內(nèi)見(jiàn)VEGF呈彌漫性棕褐色著色。PBS對(duì)照及正常兔血清對(duì)照均未見(jiàn)棕褐色著色。

2.1成纖維細(xì)胞Ⅰ型膠原蛋白表達(dá):陰性對(duì)照組KFB(圖1)、NFB及中藥組KFB(圖2)均見(jiàn)胞核核膜上呈線(xiàn)狀及核質(zhì)中呈核仁樣分布的較多Ⅰ型膠原蛋白陽(yáng)性顆粒。陰性對(duì)照組KFB胞漿中見(jiàn)大量散在分布的陽(yáng)性顆粒,陰性對(duì)照組NFB及中藥組KFB胞漿中僅見(jiàn)少數(shù)散在的陽(yáng)性顆粒。胞漿中陽(yáng)性顆粒的表達(dá)強(qiáng)度為:陰性對(duì)照組KFB>中藥組KFB≌陰性對(duì)照組NFB。陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)在陰性對(duì)照組KFB與NFB間、陰性對(duì)照組與中藥組KFB間比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

2.2 成纖維細(xì)胞MMP-1表達(dá):三組MMP-1陽(yáng)性表達(dá)均以胞核為主。陰性對(duì)照組KFB(圖3)多數(shù)胞核呈陰性反應(yīng),少數(shù)胞核中見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)顆粒、粗顆粒排列于核周或/及散在分布于核質(zhì)中;陰性對(duì)照組NFB及中藥組KFB(圖4)多數(shù)胞核呈陽(yáng)性反應(yīng),陽(yáng)性顆粒粗大甚至呈團(tuán)塊狀,散在分布于核質(zhì)中或聚集于核質(zhì)的一側(cè)。陰性對(duì)照組KFB胞漿中陽(yáng)性顆粒少見(jiàn),陰性對(duì)照組NFB及中藥組KFB胞漿中均見(jiàn)少數(shù)散在分布的陽(yáng)性顆粒。陽(yáng)性顆粒的表達(dá)強(qiáng)度為:中藥組KFB≌陰性對(duì)照組NFB>陰性對(duì)照組KFB。陰性對(duì)照組KFB的陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)低于陰性對(duì)照組NFB,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05) (表1)。 2.3 成纖維細(xì)胞VEGF的表達(dá):陰性對(duì)照組KFB(圖5)、NFB多數(shù)胞核、胞漿中均見(jiàn)VEGF陽(yáng)性顆粒,呈細(xì)顆粒、粗顆粒狀散在分布于核質(zhì)中或/及胞漿中,以胞核為主。中藥組KFB(圖6A 6B)部分細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)減弱,表現(xiàn)為胞核中少數(shù)散在的核仁樣顆粒,胞漿中呈陰性反應(yīng)或僅見(jiàn)少數(shù)散在的陽(yáng)性細(xì)顆粒;部分細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng),表現(xiàn)為胞漿中大量散在分布的陽(yáng)性粗顆粒,或大量陽(yáng)性細(xì)顆粒聚集于核周。陽(yáng)性顆粒的表達(dá)強(qiáng)度為:中藥組KFB表達(dá)增強(qiáng)區(qū)>陰性對(duì)照組KFB≌陰性對(duì)照組NFB>中藥組KFB表達(dá)減弱區(qū)。中藥組KFB的陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)低于陰性對(duì)照組KFB,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)(表1)。

3討論

K組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白的含量明顯增加,尤以Ⅰ型膠原為甚。Ⅰ型膠原蛋白的合成受諸多因素影響,直接檢測(cè)體外培養(yǎng)的KFBⅠ型膠原蛋白的表達(dá)可以避免許多內(nèi)在因素的干擾,顯現(xiàn)KFB本身所固有的特性。為了能準(zhǔn)確地判定自制中藥醇提物對(duì)成纖維細(xì)胞合成Ⅰ型膠原蛋白的影響,避免藥物抑制細(xì)胞增殖的干預(yù),本研究選擇對(duì)成纖維細(xì)胞增殖無(wú)顯著抑制作用的藥物濃度。我們的結(jié)果表明,KFB合成Ⅰ型膠原蛋白增加,表現(xiàn)為胞漿中有大量的陽(yáng)性顆粒;自制中藥醇提物可抑制KFB合成Ⅰ型膠原蛋白,表現(xiàn)為胞漿中陽(yáng)性顆粒明顯減少。然而,陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)分析并未顯示陰性對(duì)照組KFB與NFB間、陰性對(duì)照組與中藥組KFB間統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的差異,我們認(rèn)為這可能與三組成纖維細(xì)胞胞核上陽(yáng)性表達(dá)無(wú)數(shù)量上的差異有關(guān)。

近年來(lái),膠原蛋白合成與降解間的失衡在K形成中的作用引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的重視。關(guān)于K組織細(xì)胞中MMP家族的檢測(cè)與干預(yù)已成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)課題。MMP家族是一組蛋白水解酶類(lèi),它們對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)具有廣泛的降解作用。MMP-1為其家族成員之一,它可以在Ⅰ型前膠原α1、α2鏈的特殊位點(diǎn)降解膠原,使其成為1/4～3/4片段。在創(chuàng)傷修復(fù)中MMP-1可表達(dá)于真皮成纖維細(xì)胞上,以參與肉芽組織的形成和清除以及瘢痕的消退[1]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者對(duì)K病理切片進(jìn)行MMP-1免疫組化染色,結(jié)果顯示K組織中MMP-1表達(dá)較正常皮膚顯著增加[2]。鑒于成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞均可產(chǎn)生MMP-1,我們認(rèn)為檢測(cè)K組織中MMP-1的表達(dá)并不能反映出成纖維細(xì)胞合成MMP-1的實(shí)際狀況。本研究的MMP-1定性、定量分析結(jié)果顯示,體外培養(yǎng)的KFB與NFB比較,其MMP-1表達(dá)顯著降低,此結(jié)果與Arakawa等[3]、Uchida等[4]結(jié)論相符,提示KFB自身存在著MMP-1轉(zhuǎn)錄及/或翻譯水平的異常,致使KFB胞核、胞漿中MMP-1蛋白減少。在我們的臨床療效觀(guān)察中發(fā)現(xiàn),自制中藥軟膏可使K萎縮、變平、退化(待發(fā)表)。本研究顯示自制中藥醇提物可使KFB中MMP-1蛋白增多,這表明本藥物可能通過(guò)促進(jìn)KFB合成MMP-1、以降解致密增生的膠原纖維,從而達(dá)到促使K消退的治療效果。

關(guān)于K微血管狀況在K發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中的作用已成為近年來(lái)學(xué)術(shù)界爭(zhēng)論的焦點(diǎn)之一。部分學(xué)者強(qiáng)調(diào),瘢痕組織血管生成過(guò)多、血供豐富支撐著瘢痕的過(guò)度增生。另有學(xué)者認(rèn)為,瘢痕組織供血不足、組織缺氧誘發(fā)K;瘢痕內(nèi)血管通路的建立、正常微循環(huán)的形成對(duì)瘢痕的退化有促進(jìn)作用[5-6]。新近的研究表明,K部位不同,組織內(nèi)微血管狀況亦不同;浸潤(rùn)部微血管數(shù)量增加,老化部微血管數(shù)量減少[7]。多數(shù)文獻(xiàn)支持K組織中VEGF表達(dá)增高[7-10],其主要分布或真皮成纖維細(xì)胞上[7-8,10],或表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中[9];VEGF表達(dá)K浸潤(rùn)部>K周邊正常皮膚≌K增生部>K老化部≌正常人皮膚[10]。由此可見(jiàn),對(duì)于臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣的K皮損而言,單純地促使或抑制血管增生均欠全面,須根據(jù)K皮損的不同表現(xiàn)分別采取相應(yīng)的治療。本研究結(jié)果顯示,在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)的KFB其VEGF表達(dá)與NFB比較無(wú)明顯差異,即KFB就單個(gè)細(xì)胞而言無(wú)VEGF合成增多。我們推測(cè)以往學(xué)者檢測(cè)到的KFB上VEGF高表達(dá)可能與組織中的微環(huán)境及相關(guān)因子的作用有關(guān),或與組織中KFB增多有關(guān)。KFB在自制中藥醇提物的作用下,雖與陰性對(duì)照組比較其VEGF陽(yáng)性細(xì)胞百分計(jì)數(shù)顯著減少,但卻同時(shí)顯現(xiàn)VEGF表達(dá)明顯減弱及顯著增強(qiáng),即表明該藥物對(duì)KFB VEGF的合成具有雙向調(diào)節(jié)作用,可使部分KFB合成VEGF增多而部分KFB合成VEGF減少,這是否意味著K組織中存在著具有不同VEGF合成機(jī)制的成纖維細(xì)胞,是否意味著調(diào)動(dòng)成纖維細(xì)胞的這種雙向反應(yīng)以促進(jìn)及抑制血管增生對(duì)K的治療更有益,尚需要進(jìn)一步研究。

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篇（7）

隨著社會(huì)科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，生物技術(shù)被廣泛地應(yīng)用在各個(gè)生產(chǎn)領(lǐng)域，對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展產(chǎn)生了極大的影響。生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中，對(duì)于林業(yè)工作本身而言具有一定的積極意義，但是其技術(shù)應(yīng)用的過(guò)程中也存在著一些亟待解決的問(wèn)題，需要相關(guān)部門(mén)重視并及時(shí)解決。因此，在實(shí)際工作中，重視生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的問(wèn)題解決，可以有效地改善林業(yè)生產(chǎn)中存在的問(wèn)題，促進(jìn)生態(tài)林業(yè)建設(shè)事業(yè)快速發(fā)展。

1生物技術(shù)應(yīng)用概述

現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展，促進(jìn)了林業(yè)生產(chǎn)向更高層次發(fā)展。生物技術(shù)應(yīng)用主要是結(jié)合林業(yè)生產(chǎn)工作的實(shí)際情況，應(yīng)用生命科學(xué)的研究成果，對(duì)生物或者生物成分進(jìn)行改造和利用的一種技術(shù)?，F(xiàn)代生物技術(shù)在綜合細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信息學(xué)等各項(xiàng)科學(xué)技術(shù)的基礎(chǔ)上，實(shí)現(xiàn)了對(duì)生物細(xì)胞的分離、變異篩選，為進(jìn)一步提高生物技術(shù)的應(yīng)用水平奠定了良好的基礎(chǔ)。生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的問(wèn)題探討，也是有效開(kāi)展林業(yè)生產(chǎn)工作的重要前提。因此，在林業(yè)生產(chǎn)工作中，重視生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的問(wèn)題探討，具有積極的現(xiàn)實(shí)意義。

2生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的重要性

在林業(yè)生產(chǎn)中，傳統(tǒng)的病蟲(chóng)害防治，促使很多有益的昆蟲(chóng)，比如害蟲(chóng)的天敵喪生，生態(tài)平衡遭到了一定程度的破壞?；瘜W(xué)制劑的不合理使用，導(dǎo)致藥物在自然界殘留，直接危害了植物的生長(zhǎng)。將生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)工作，不但可以有效地改善植物生長(zhǎng)的環(huán)境，彌補(bǔ)其培育中存在的不足，而且有利于改善長(zhǎng)期以來(lái)使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致的各種問(wèn)題。因此，在林業(yè)生產(chǎn)工作中，重視生物技術(shù)的應(yīng)用，并及時(shí)采用有效的發(fā)展方案，可促進(jìn)林業(yè)生產(chǎn)工作的順利進(jìn)行。

3生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的問(wèn)題

3.1轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的安全性

在實(shí)際工作中，轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的安全性，是生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中非常重要的一項(xiàng)內(nèi)容。轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的安全性，主要涉及到作物生長(zhǎng)過(guò)程中的除草劑抗性、開(kāi)花或育性的降低等方面的問(wèn)題。根據(jù)轉(zhuǎn)基因樹(shù)木生長(zhǎng)中可能會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行分析，是轉(zhuǎn)基因樹(shù)木安全性探究的有效手段。因此，為了有效地促進(jìn)林業(yè)生產(chǎn)工作，重視轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的安全性問(wèn)題分析非常重要。

3.2利用林業(yè)生物技術(shù)的公平性

在林業(yè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)，如何利用林業(yè)生物技術(shù)的公平性，也是生物技術(shù)應(yīng)用于林業(yè)生產(chǎn)中的主要問(wèn)題。由于部分轉(zhuǎn)基因樹(shù)木的資源被控制在私人公司，因此被其轉(zhuǎn)化為具有高額經(jīng)濟(jì)價(jià)值的產(chǎn)品，并形成行業(yè)壟斷，人們利用生物技術(shù)的成果受阻。從中我們可看到林業(yè)生物技術(shù)的應(yīng)用，仍存在著一定的不平衡現(xiàn)象。因此，在實(shí)際工作中，重視分析利用林業(yè)生物技術(shù)的公平性問(wèn)題也非常重要。

篇（8）

現(xiàn)代社會(huì)，科學(xué)技術(shù)突飛猛進(jìn)，食品處理與加工技術(shù)不斷創(chuàng)新，食品安全檢測(cè)檢驗(yàn)面臨著新形勢(shì)與新任務(wù)，必須采取行之有效的技術(shù)方法準(zhǔn)確掌握食品安全狀況，杜絕食品問(wèn)題，以免對(duì)人民群眾的身體健康造成不良影響，保障經(jīng)濟(jì)社會(huì)持續(xù)健康穩(wěn)定發(fā)展。本文就此展開(kāi)探討。

1現(xiàn)代生物技術(shù)的起源及其重要性

生物技術(shù)涵蓋了生物學(xué)、化學(xué)、信息科學(xué)等多學(xué)科知識(shí)，重點(diǎn)在于探究發(fā)現(xiàn)生物的遺傳與變異。生物技術(shù)有助于研發(fā)更高品質(zhì)、更具應(yīng)用價(jià)值的生物類(lèi)產(chǎn)品，滿(mǎn)足人類(lèi)經(jīng)濟(jì)社會(huì)快速發(fā)展下的物質(zhì)需求。生物技術(shù)最早起源于經(jīng)典遺傳學(xué)，早期科學(xué)家在特定試驗(yàn)條件下，發(fā)現(xiàn)了遺傳物質(zhì)的分離與結(jié)合。之后，經(jīng)過(guò)幾代科研人員的共同努力，逐漸認(rèn)識(shí)了“基因”，使現(xiàn)代生物技術(shù)的實(shí)踐應(yīng)用成為可能。有觀(guān)點(diǎn)認(rèn)為，生物技術(shù)將成為現(xiàn)代生物學(xué)與化學(xué)的重點(diǎn)研究與發(fā)展方向[1]。當(dāng)前，食品安全問(wèn)題備受社會(huì)關(guān)注，農(nóng)藥殘留與添加劑超標(biāo)等問(wèn)題頻頻發(fā)生。因此，應(yīng)用生物技術(shù)強(qiáng)化食品檢驗(yàn)具有深刻的現(xiàn)實(shí)意義[1]。

2食品檢驗(yàn)中常用的生物檢測(cè)技術(shù)

2.1生物酶技術(shù)

生物酶技術(shù)是食品檢驗(yàn)工作常用的現(xiàn)代技術(shù)方法之一，具有顯著的免疫分析技術(shù)特征，檢測(cè)效率高，數(shù)據(jù)準(zhǔn)確率高，可真實(shí)反映食品安全現(xiàn)狀。在實(shí)際操作中，生物酶技術(shù)通過(guò)提取食品檢驗(yàn)樣品，對(duì)其中含有的化學(xué)成分進(jìn)行精準(zhǔn)分析與識(shí)別，極大程度上降低檢驗(yàn)誤差。

2.2分子生物技術(shù)

分子生物技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用重點(diǎn)在于檢驗(yàn)病原微生物，有效研判食品中的微生物與寄生蟲(chóng)含量，進(jìn)而對(duì)食品的污染程度做出判斷。同時(shí)，在分子生物技術(shù)的支持下，可精準(zhǔn)掌握部分微生物的基因變化狀況，分析基因序列特點(diǎn)。隨著食品檢驗(yàn)要求的不斷提高，分子生物技術(shù)的應(yīng)用深度持續(xù)提高[2]。

2.3生物傳感器技術(shù)

生物傳感器技術(shù)主要依托于特定儀器設(shè)備，檢測(cè)分析食品中所包含的抗原、抗體及其他大分子物質(zhì)的含量，通過(guò)特定儀器設(shè)備將食品中待測(cè)目標(biāo)物相關(guān)信息轉(zhuǎn)換成為可直觀(guān)識(shí)別的信息，進(jìn)而完成對(duì)待測(cè)目標(biāo)物的檢測(cè)。應(yīng)用生物傳感技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，可掌握食品中致病菌的類(lèi)型與含量，蛋白質(zhì)與糖分的品質(zhì)等。

2.4生物芯片

生物芯片技術(shù)主要利用生物芯片檢測(cè)儀器，獲取生物分子信號(hào)，獲知食品分子狀況，進(jìn)而得出相應(yīng)的檢驗(yàn)結(jié)果。生物芯片技術(shù)檢測(cè)效率較高，可在短時(shí)間內(nèi)完成更多檢測(cè)任務(wù)，檢驗(yàn)數(shù)據(jù)可信度高，是當(dāng)前和未來(lái)一段時(shí)間內(nèi)最為可靠的檢驗(yàn)技術(shù)之一[3]。

3食品檢驗(yàn)中現(xiàn)代生物技術(shù)的應(yīng)用

3.1檢驗(yàn)有害微生物

眾所周知，當(dāng)前食品種類(lèi)呈出多樣化發(fā)展趨勢(shì)，各類(lèi)新型食品紛紛問(wèn)世，對(duì)食品安全檢驗(yàn)提出了挑戰(zhàn)與考驗(yàn)。加之食品從生產(chǎn)到出廠(chǎng)流通再到批發(fā)零售，最終流向消費(fèi)終端進(jìn)入消費(fèi)者手中，流程環(huán)節(jié)較多，可能受到的污染較多，容易滋生致病菌與有害微生物，帶有致病菌與有害微生物的食品一旦被食用，將嚴(yán)重影響人們的身體健康。因此，在食品檢驗(yàn)中，必須強(qiáng)化現(xiàn)代生物技術(shù)的運(yùn)用，有效檢驗(yàn)食品中的有害微生物，并出具相應(yīng)的檢驗(yàn)檢測(cè)數(shù)據(jù)報(bào)告，只有滿(mǎn)足要求才能進(jìn)入市場(chǎng)流通。

3.2檢驗(yàn)殘留農(nóng)藥

長(zhǎng)期以來(lái)，國(guó)家高度重視食品農(nóng)藥殘留，相繼制定了一系列減少與控制農(nóng)藥殘留的方針政策，取得了令人矚目的成就。但是農(nóng)藥是使農(nóng)作物正常生長(zhǎng)的重要物質(zhì)，對(duì)于提高作物產(chǎn)量與品質(zhì)，減少病蟲(chóng)害的發(fā)生具有關(guān)鍵作用。通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)檢驗(yàn)食品殘留農(nóng)藥，依舊是生物技術(shù)應(yīng)用中的一項(xiàng)重大課題。當(dāng)前，我國(guó)已經(jīng)制定了符合我國(guó)國(guó)情的農(nóng)藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)生物酶技術(shù)與傳感技術(shù)的有效運(yùn)用，準(zhǔn)確檢測(cè)農(nóng)藥殘留指標(biāo)，杜絕農(nóng)藥殘留超標(biāo)的食品流向市場(chǎng)，確保食品安全[4]。

3.3檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因食品

在現(xiàn)代基因技術(shù)的支持下，轉(zhuǎn)基因食品開(kāi)始進(jìn)入人們的日常生活。轉(zhuǎn)基因技術(shù)利用基因遺傳原理，對(duì)食品原材料的基因片段進(jìn)行改造，然后將其加工成食品。轉(zhuǎn)基因食品的安全性至今仍存在較大爭(zhēng)議，但大部分人對(duì)轉(zhuǎn)基因食品持謹(jǐn)慎態(tài)度，部分質(zhì)量低劣的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品，對(duì)人體造成的傷害是不可逆轉(zhuǎn)的。因此，必須通過(guò)現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因食品進(jìn)行專(zhuān)項(xiàng)檢驗(yàn)，準(zhǔn)確識(shí)別轉(zhuǎn)基因食品的安全系數(shù)，有效掌握轉(zhuǎn)基因食品構(gòu)成，并在食品包裝上做出明確標(biāo)識(shí)，全面體現(xiàn)轉(zhuǎn)基因食品特征，保障食品市場(chǎng)健康有序。

4現(xiàn)代生物技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用趨勢(shì)

4.1高效化

在科學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展和進(jìn)步的時(shí)代背景下，食品檢驗(yàn)技術(shù)會(huì)呈現(xiàn)出新的發(fā)展趨勢(shì)，現(xiàn)代生物技術(shù)也會(huì)表現(xiàn)出明顯的高效化特征。高效化集中表現(xiàn)為操作流程更加簡(jiǎn)單，食品檢測(cè)時(shí)間縮短，能在短時(shí)間內(nèi)完成檢測(cè)任務(wù)，并準(zhǔn)確獲取相關(guān)數(shù)據(jù)資料，提高食品檢測(cè)效率。

4.2多樣化

篇（9）

近年來(lái)，伴隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，生態(tài)環(huán)境受到嚴(yán)重威脅。農(nóng)業(yè)水污染作為我國(guó)發(fā)展面臨的主要問(wèn)題，受到我國(guó)專(zhuān)業(yè)人士的廣泛關(guān)注，農(nóng)業(yè)水污染來(lái)源廣泛，如工業(yè)廢水、生活污水以及江河湖泊的水華等。傳統(tǒng)水污染的治理措施主要以物理和化學(xué)方法為主，雖取得一定成效但是由于自身的因素易對(duì)周?chē)h(huán)境造成破壞且運(yùn)行成本高而未能廣泛使用，生物技術(shù)作為一種新型技術(shù)，可以依靠動(dòng)植物和微生物作為反應(yīng)器對(duì)污水進(jìn)行加工處理，但是由于技術(shù)成熟性，生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)水污染治理中仍然存在很多問(wèn)題有待于解決。

1對(duì)生物技術(shù)的解讀

生物技術(shù)，是指人們利用現(xiàn)存的生物進(jìn)行體內(nèi)物質(zhì)和能量運(yùn)動(dòng)原理生產(chǎn)出對(duì)人體及環(huán)境有益的物質(zhì)。通常來(lái)說(shuō)，生物技術(shù)是指利用微生物、動(dòng)植物的生理活動(dòng)對(duì)被污染的物質(zhì)進(jìn)行加工、處理和修飾，最后生產(chǎn)出對(duì)環(huán)境有益的物質(zhì)。20世紀(jì)80年代，國(guó)際合作及發(fā)展組織就對(duì)生物技術(shù)有了明確的定義，隨著生物技術(shù)科學(xué)領(lǐng)域的不斷發(fā)展，現(xiàn)代生物技術(shù)作為一種新型的科學(xué)技術(shù)已經(jīng)被世界廣泛接受和使用，現(xiàn)代生物技術(shù)主用包括基因工程、酶工程以及細(xì)胞工程。經(jīng)過(guò)不斷地摸索和探究，人們發(fā)現(xiàn)利用生物的生理特征可以有效治理農(nóng)業(yè)水污染，如降解能力、吸附能力，這樣既可以節(jié)省成本又可以獲得高水平的污水處理效果，但由于目前生物技術(shù)仍處于初級(jí)水平，并不能很好地控制生物在外界因素影響下仍能高效地進(jìn)行污水凈化處理，因此生物技術(shù)在農(nóng)業(yè)水污染治理中仍然存在許多問(wèn)題有待于進(jìn)一步優(yōu)化。

2生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染的現(xiàn)狀

2.1生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染中的政府支持力度

生物技術(shù)作為一種新型污水處理技術(shù)受到世界各國(guó)的廣泛重視，我國(guó)作為人口最多的國(guó)家，農(nóng)業(yè)水體污染可以追溯到每位居民的飲食住行，因此加強(qiáng)生物技術(shù)的研究勢(shì)在必行。農(nóng)業(yè)水污染的主要物質(zhì)有氮磷的富營(yíng)養(yǎng)化、農(nóng)藥的降解、懸浮物、硫化物和重金屬等，由于農(nóng)業(yè)污水的有機(jī)物含量高，易造成水體腐敗，對(duì)周邊的農(nóng)作物造成直接影響，導(dǎo)致農(nóng)作物成熟不良、抗逆性差且易發(fā)生病害。目前水體污染引起政府的高度重視，2000多家的農(nóng)藥制造企業(yè)已有500多家生物農(nóng)藥制造企業(yè)，各級(jí)政府積極實(shí)施政策和方針，如2013年，浙江省通過(guò)建立水源地水質(zhì)自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)為農(nóng)業(yè)水體的凈化提供了有力保障。

2.2生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染中的市場(chǎng)使用現(xiàn)狀

農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)的應(yīng)用不僅是國(guó)內(nèi)市場(chǎng)發(fā)展戰(zhàn)略的趨勢(shì)，更是世界市場(chǎng)農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要戰(zhàn)略目標(biāo)。我國(guó)擁有遼闊的土地面積，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)技術(shù)相對(duì)先進(jìn)，但面臨的農(nóng)業(yè)水污染問(wèn)題如不能盡快解決，將給我國(guó)農(nóng)業(yè)發(fā)展和農(nóng)業(yè)市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)帶來(lái)空前的災(zāi)難；農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)作為生物技術(shù)的重要研究?jī)?nèi)容，在經(jīng)濟(jì)全球化的背景下應(yīng)加快生物技術(shù)的研究工作，加強(qiáng)市場(chǎng)與農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)的聯(lián)系，使生物技術(shù)存在的缺陷和問(wèn)題能夠盡快解決。2011年，英國(guó)、法國(guó)等多個(gè)國(guó)家共同建立生物信息科技園、生物風(fēng)險(xiǎn)基金等，向全世界展示了生物技術(shù)商業(yè)化的發(fā)展趨勢(shì)，隨著農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)的推廣，生物技術(shù)商業(yè)化也出現(xiàn)了相應(yīng)的問(wèn)題，如是否建立更多的生物技術(shù)商業(yè)區(qū)，如何處理農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)出現(xiàn)的問(wèn)題成為世界生物學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)。

3生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染中存在的問(wèn)題及原因分析

伴隨著農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)的應(yīng)用，農(nóng)業(yè)水污染的問(wèn)題得到了有效解決，但是由于農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)仍處于初級(jí)階段，目前還存在許多問(wèn)題有待于進(jìn)一步優(yōu)化，

3.1生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染中存在的問(wèn)題

3.1.1無(wú)法替代部分農(nóng)藥與分解

傳統(tǒng)的農(nóng)藥主要含汞劑和砷劑為主，這類(lèi)農(nóng)藥可以在植物體內(nèi)積累，并且產(chǎn)生有害毒素，擾亂植物的成熟期，部分藥物還含有尼古丁、生物堿、赤霉素等，這些農(nóng)藥在今天很難被生物技術(shù)所代替，并且由于農(nóng)藥的復(fù)雜性，部分微生物也無(wú)法對(duì)其進(jìn)行分解。傳統(tǒng)農(nóng)藥的專(zhuān)一性不高，因此常常會(huì)對(duì)周?chē)闹参锂a(chǎn)生毒害作用，因此必須加強(qiáng)生物技術(shù)的研制工作，將遺留下來(lái)的農(nóng)藥進(jìn)行分解，使農(nóng)業(yè)水污染的情況有所改善。

3.1.2無(wú)法滿(mǎn)足部分生物依賴(lài)的生存環(huán)境

農(nóng)業(yè)水污染的主要來(lái)源是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)生活中產(chǎn)生的污染物造成的污染，如農(nóng)藥、化肥、糞便等，這類(lèi)污染物不易被降解，久而久之就會(huì)對(duì)生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重的破壞，水體造成嚴(yán)重污染，這使得部分微生物的生存造成威脅，此外，外部壞境的改變也使得微生物無(wú)法滿(mǎn)足賴(lài)以生存的生物圈，因此，農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)面臨著無(wú)法使部分微生物正常存活的困難，這也是生物技術(shù)發(fā)展面臨的主要困難之一。

3.2生物技術(shù)治理農(nóng)業(yè)水污染中存在問(wèn)題的原因分析

生物技術(shù)作為一種新型生物科學(xué)技術(shù)，目前被應(yīng)用到各個(gè)領(lǐng)域，我國(guó)作為一個(gè)農(nóng)業(yè)大國(guó)，在農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)方面尚未成熟，主要原因有：

（1）起步時(shí)間晚，我國(guó)生物技術(shù)相對(duì)于其他發(fā)達(dá)國(guó)家發(fā)展緩慢。

（2）內(nèi)容缺乏，目前生物技術(shù)主要以水生藻類(lèi)、微生物為主，這類(lèi)生物易被環(huán)境干擾。

（3）缺乏合理的規(guī)劃，在農(nóng)業(yè)水污染控制方面以治理為主，忽視了預(yù)防的重要性。農(nóng)業(yè)水污染問(wèn)題關(guān)系到每位居民，在經(jīng)濟(jì)快速發(fā)展的時(shí)代里，我們應(yīng)該珍惜我們的家園，愛(ài)護(hù)我們的環(huán)境。

4結(jié)語(yǔ)

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、資源的浪費(fèi)，農(nóng)業(yè)水污染成為世界人民關(guān)注的熱點(diǎn)話(huà)題，本文首先分析了當(dāng)前農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)的現(xiàn)狀，接著從生物技術(shù)的替代與分解、生存環(huán)境和規(guī)劃問(wèn)題三個(gè)方面，探究了農(nóng)業(yè)水污染生物技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中存在的問(wèn)題，最后理性的對(duì)全文進(jìn)行總結(jié)。

[參考文獻(xiàn)]

篇（10）

生物技術(shù)在改善人類(lèi)健康狀況及生存環(huán)境、提高農(nóng)牧業(yè)以及工業(yè)的產(chǎn)量與質(zhì)量方面正在發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展將最終解決世界人口、糧食、環(huán)境、健康、能源和海洋等影響二十一世紀(jì)人類(lèi)生存的重大問(wèn)題，所以，21世紀(jì)被稱(chēng)為生物技術(shù)的時(shí)代。本文探討生物技術(shù)專(zhuān)利保護(hù)的創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生物技術(shù)創(chuàng)新和生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響，從而提高生物技術(shù)的自主創(chuàng)新能力，促進(jìn)創(chuàng)新型國(guó)家的建設(shè)。

一、生物技術(shù)的發(fā)展前景及其專(zhuān)利保護(hù)的研究現(xiàn)狀

“生物技術(shù)”一詞最早是由匈牙利工程師Karl Ereky 于1917年首先提出的。美國(guó)商務(wù)部認(rèn)為，生物技術(shù)是用生物體或者它們的細(xì)胞、亞細(xì)胞或者分子成分來(lái)生產(chǎn)產(chǎn)品或者修飾特定的植物、動(dòng)物和微生物的技術(shù)。它包括基因重組技術(shù)、分子生物學(xué)和其他領(lǐng)域發(fā)展出來(lái)的診療兼并的方法、動(dòng)物和植物馴化技術(shù)、發(fā)酵技術(shù)、生物信息學(xué)等。在發(fā)達(dá)國(guó)家，生物技術(shù)已經(jīng)成為一個(gè)新的經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)點(diǎn)，其增長(zhǎng)速度大致是在25%～30%，是整個(gè)經(jīng)濟(jì)增長(zhǎng)平均數(shù)的8～10倍左右。中國(guó)在該領(lǐng)域已經(jīng)具備了較好的基礎(chǔ)，當(dāng)初中國(guó)參加國(guó)際人類(lèi)基因組計(jì)劃的時(shí)候，只爭(zhēng)取到了人類(lèi)基因組1%的測(cè)序任務(wù)，但現(xiàn)在中國(guó)科學(xué)家經(jīng)過(guò)持續(xù)的努力，已經(jīng)獲得了國(guó)際蛋白質(zhì)組計(jì)劃的主要項(xiàng)目――國(guó)際人類(lèi)肝臟蛋白質(zhì)組計(jì)劃的領(lǐng)導(dǎo)權(quán)。中國(guó)將承擔(dān)整個(gè)國(guó)際蛋白質(zhì)組計(jì)劃20%以上的任務(wù)。生物技術(shù)的迅速發(fā)展和美好前景的實(shí)現(xiàn)離不開(kāi)法律制度尤其是專(zhuān)利制度對(duì)其有效的保護(hù)，但是由于生物技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)會(huì)涉及宗教、倫理道德和人類(lèi)自身的安全等問(wèn)題，所以對(duì)生物技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)不僅是法律問(wèn)題，而且是社會(huì)問(wèn)題。雖然有關(guān)專(zhuān)利制度對(duì)技術(shù)發(fā)展的作用的爭(zhēng)議由來(lái)已久，但專(zhuān)利制度對(duì)技術(shù)尤其是現(xiàn)代技術(shù)的推動(dòng)作用是不言而喻的。隨著科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，絕大多數(shù)國(guó)家不但建立專(zhuān)利制度，而且修訂頻率不斷加速就是專(zhuān)利制度對(duì)科學(xué)技術(shù)發(fā)展具有巨大推動(dòng)力的很好例證。近年來(lái)在專(zhuān)利制度的研究領(lǐng)域，有關(guān)現(xiàn)代技術(shù)，特別是計(jì)算機(jī)技術(shù)和生物技術(shù)的專(zhuān)利保護(hù)問(wèn)題成為學(xué)者研究的熱點(diǎn)。不過(guò)，有學(xué)者認(rèn)為，盡管生物技術(shù)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)問(wèn)題對(duì)中國(guó)來(lái)說(shuō)很重要，但是中國(guó)在生物技術(shù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)方面的研究還極為薄弱。就生物技術(shù)的知識(shí)產(chǎn)權(quán)研究，尤其是專(zhuān)利保護(hù)研究來(lái)說(shuō)，近年來(lái)研究主要集中在生物技術(shù)的可專(zhuān)利性方面。在專(zhuān)利的實(shí)質(zhì)要件中，創(chuàng)造性不但最重要，而且最復(fù)雜。

二、專(zhuān)利保護(hù)的創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)與技術(shù)創(chuàng)新的關(guān)系

專(zhuān)利法規(guī)定發(fā)明的創(chuàng)造性是指同申請(qǐng)日以前已有的技術(shù)相比，該發(fā)明有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。創(chuàng)造性是一個(gè)相對(duì)的概念，是與申請(qǐng)日（享有優(yōu)先權(quán)的，是指優(yōu)先權(quán)日）以前的已有技術(shù)對(duì)比來(lái)說(shuō)的。專(zhuān)利法所說(shuō)的已有技術(shù)是指“申請(qǐng)日（享有優(yōu)先權(quán)的，是指優(yōu)先權(quán)日）前在國(guó)內(nèi)外出版物上公開(kāi)發(fā)表、在國(guó)內(nèi)公開(kāi)使用或者以其他方式為公眾所知的技術(shù)，即現(xiàn)有技術(shù)?！眲?chuàng)造性不是一個(gè)可以用尺子來(lái)衡量的客觀(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)它的判斷要靠人的思維才能作出。這個(gè)人就是所謂的“發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員”，他是一個(gè)假想的人，他了解所屬技術(shù)領(lǐng)域的現(xiàn)有技術(shù)，具有該技術(shù)領(lǐng)域中技術(shù)人員所具有的一般知識(shí)和能力。而且他的知識(shí)水平隨著時(shí)間的進(jìn)展而有所不同。所以審查員在判斷創(chuàng)造性時(shí)，要參照這樣一個(gè)假想的人的認(rèn)識(shí)水平來(lái)衡量，而不能完全有自己主觀(guān)認(rèn)定。當(dāng)然，“在這條試圖走向‘客觀(guān)性’終點(diǎn)的道路中，已經(jīng)布滿(mǎn)了主觀(guān)性的荊棘。”因此，專(zhuān)利保護(hù)的創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)問(wèn)題是一個(gè)客觀(guān)性和主觀(guān)織在一起復(fù)雜而又重要的問(wèn)題，其重要性不僅體現(xiàn)在它決定著是否發(fā)明受專(zhuān)利法保護(hù)，更為重要的是它關(guān)系到技術(shù)創(chuàng)新、產(chǎn)業(yè)發(fā)展和經(jīng)濟(jì)繁榮的重大問(wèn)題。

提高專(zhuān)利保護(hù)的創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)是否一定會(huì)推動(dòng)技術(shù)創(chuàng)新和發(fā)展呢？應(yīng)該具體問(wèn)題具體分析。生物技術(shù)創(chuàng)新與其他技術(shù)創(chuàng)新一樣，離不開(kāi)研發(fā)主體的大量投資。對(duì)一個(gè)理性的經(jīng)濟(jì)人而言，研發(fā)投資數(shù)量的多少，在一定程度上取決于該項(xiàng)投資的經(jīng)濟(jì)回報(bào)。換句話(huà)說(shuō)，企業(yè)花費(fèi)多少的資金搞研發(fā)，研發(fā)什么樣的項(xiàng)目，是由它們對(duì)不同的研發(fā)項(xiàng)目回報(bào)的預(yù)期利潤(rùn)決定的，或者說(shuō)，企業(yè)總是將有限的資源投放在預(yù)期回報(bào)率最高的項(xiàng)目。研發(fā)項(xiàng)目帶來(lái)的預(yù)期回報(bào)由多種因素決定，如研發(fā)成本、取得發(fā)明的可能性、發(fā)明獲得專(zhuān)利保護(hù)的可能性和專(zhuān)利保護(hù)期內(nèi)的利潤(rùn)率等。這些因素之所以重要，是因?yàn)槿绻邪l(fā)成本低，取得發(fā)明的可能性和發(fā)明獲得專(zhuān)利保護(hù)的可能性大，企業(yè)的研發(fā)投資回報(bào)率就高。專(zhuān)利法對(duì)研發(fā)投資的回報(bào)體現(xiàn)在兩個(gè)方面:(1)專(zhuān)利法規(guī)定了可專(zhuān)利性客體范圍和客體被授予專(zhuān)利的可能性;(2)專(zhuān)利法的規(guī)定直接影響著研發(fā)投資者在專(zhuān)利保護(hù)期內(nèi)利益回報(bào)率。如果專(zhuān)利法降低可專(zhuān)利性標(biāo)準(zhǔn)，尤其是采用較低的創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，會(huì)對(duì)研發(fā)投資的回報(bào)產(chǎn)生兩種作用相反的效果。一方面隨著可專(zhuān)利性標(biāo)準(zhǔn)，尤其是創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)的降低，未來(lái)會(huì)有更多的發(fā)明創(chuàng)造受到專(zhuān)利保護(hù)。企業(yè)對(duì)源于他人專(zhuān)利的創(chuàng)造獲得專(zhuān)利保護(hù)的可能性就會(huì)增加。另一方面企業(yè)也會(huì)因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)對(duì)手對(duì)其模仿動(dòng)力的加大而失去一些利益。企業(yè)要想在競(jìng)爭(zhēng)中獲勝，最好的、也是最重要的手段是創(chuàng)造、擁有和有效地使用自己的專(zhuān)利。但是，如果從專(zhuān)利中獲得的利益越來(lái)越少，那么專(zhuān)利的價(jià)值也就越來(lái)越小，企業(yè)的研發(fā)投資數(shù)量也會(huì)越來(lái)越少，從而使得技術(shù)創(chuàng)新能力越來(lái)越低，反之依然。對(duì)立法者而言，關(guān)鍵在于他們認(rèn)為哪一種影響更為重要。如果發(fā)明取得專(zhuān)利保護(hù)的可能性的增加小于專(zhuān)利價(jià)值下降的幅度，研發(fā)的預(yù)期回報(bào)就會(huì)增加，從而刺激新的研發(fā)投資，提高創(chuàng)新能力，取得更多的創(chuàng)新成果。不過(guò)，如果取得專(zhuān)利保護(hù)的可能性的增加大于專(zhuān)利價(jià)值下降的幅度，研發(fā)的預(yù)期回報(bào)就會(huì)減少。這將阻礙企業(yè)進(jìn)行研發(fā)投資，從而降低研發(fā)主體的創(chuàng)新能力。

三、國(guó)際公約與不同國(guó)家對(duì)生物技術(shù)專(zhuān)利保護(hù)及其創(chuàng)造性條件的判定

《巴黎公約》第一條第三款:“對(duì)工業(yè)產(chǎn)權(quán)應(yīng)作最廣義的理解，不僅應(yīng)適用于工業(yè)和商業(yè)本身，而且也應(yīng)該同時(shí)適用于農(nóng)業(yè)和采掘業(yè)，適用于一切制成品和天然產(chǎn)品，例如，酒類(lèi)、谷類(lèi)、煙葉、水果、牲畜、礦產(chǎn)品、礦泉水、啤酒、花卉和面粉?！盩RIPS協(xié)議的第27條第一款規(guī)定，在符合本條第二款（保護(hù)公共秩序或道德的例外）和本條第三款（人類(lèi)或者動(dòng)物的診療方法和動(dòng)植物品種的例外）的前提下，一切技術(shù)領(lǐng)域的任何發(fā)明，無(wú)論產(chǎn)品發(fā)明或者方法發(fā)明，只要其新穎、含創(chuàng)造性并可付諸工業(yè)應(yīng)用均應(yīng)有可能獲得專(zhuān)利。美國(guó)對(duì)生物技術(shù)方法發(fā)明非顯而易見(jiàn)性有其特殊規(guī)定。生物技術(shù)方法專(zhuān)利重要成果是對(duì)美國(guó)專(zhuān)利法第103條的修改（即增加103（b）），即對(duì)于一項(xiàng)生物技術(shù)方法，如果其使用的原料或/和生產(chǎn)的合成物具有可專(zhuān)利性，那么該生物技術(shù)方法是具有顯而易見(jiàn)性的。歐洲專(zhuān)利局的審查員通常應(yīng)用問(wèn)題與解決方案的方法來(lái)審查專(zhuān)利申請(qǐng)的技術(shù)是否具有創(chuàng)造性，同時(shí)在審查發(fā)明的創(chuàng)造性時(shí)，歐洲專(zhuān)利局的審查指南要求考慮發(fā)明創(chuàng)造的輔標(biāo)記（第二標(biāo)記），如發(fā)明克服技術(shù)偏見(jiàn)、需要解決的問(wèn)題存在時(shí)間的長(zhǎng)短、發(fā)明對(duì)長(zhǎng)時(shí)間需求的滿(mǎn)足、發(fā)明在商業(yè)上的成功以及發(fā)明的意想不到效果等。日本生物技術(shù)發(fā)明的創(chuàng)造性判定的基本原則是：如果獲得該與基因相關(guān)的發(fā)明是容易的，而該發(fā)明又不具有不能預(yù)見(jiàn)的優(yōu)越的效果，則該發(fā)明不具有創(chuàng)造性；盡管獲得該與基因有關(guān)的發(fā)明是容易的，但該發(fā)明具有不能預(yù)見(jiàn)的優(yōu)越性，則該發(fā)明具有創(chuàng)造性。中國(guó)專(zhuān)利法（以下簡(jiǎn)稱(chēng)專(zhuān)利法）規(guī)定，授予專(zhuān)利權(quán)的發(fā)明和實(shí)用新型，應(yīng)當(dāng)具備新穎性、創(chuàng)造性和實(shí)用性。創(chuàng)造性，是指同申請(qǐng)日以前已有的技術(shù)相比，該發(fā)明有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，該實(shí)用新型有實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和進(jìn)步。盡管生物技術(shù)在許多國(guó)家已經(jīng)得到知識(shí)產(chǎn)權(quán)保護(hù)，然而，中國(guó)在2000年修訂通過(guò)的專(zhuān)利法依然沒(méi)有把生物技術(shù)發(fā)明納入保護(hù)范圍。2001年公布的《專(zhuān)利法實(shí)施細(xì)則》對(duì)《專(zhuān)利法》中的“授予專(zhuān)利的條件”避而不作解釋和說(shuō)明。但是在第25、26條增加了“新的生物材料”的申請(qǐng)與實(shí)驗(yàn)的規(guī)定。這實(shí)際上等于在某種程度上，承認(rèn)了生物技術(shù)的可專(zhuān)利性。

四、適度降低生物技術(shù)專(zhuān)利保護(hù)創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，促進(jìn)生物技術(shù)創(chuàng)新

創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)的降低對(duì)特定產(chǎn)業(yè)中研發(fā)活動(dòng)的影響取決于該產(chǎn)業(yè)最初的創(chuàng)新速度；這種創(chuàng)新速度又取決于該產(chǎn)業(yè)技術(shù)進(jìn)步和致力于推進(jìn)這些技術(shù)進(jìn)步的資源的機(jī)會(huì)。一些產(chǎn)業(yè)，如生物技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)產(chǎn)業(yè)的創(chuàng)新速度要快于其他一些產(chǎn)業(yè)，如鋼鐵、采礦和石油冶煉等產(chǎn)業(yè)。一般而言，一些相對(duì)較老的夕陽(yáng)產(chǎn)業(yè)的創(chuàng)新速度要慢一些。對(duì)這類(lèi)產(chǎn)業(yè)而言，推出有益于競(jìng)爭(zhēng)的新專(zhuān)利技術(shù)需要花費(fèi)更多的時(shí)間，同時(shí)，其他企業(yè)要模仿該技術(shù)或者作出該發(fā)明創(chuàng)造的周邊發(fā)明創(chuàng)造并取得專(zhuān)利保護(hù)需要相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間。由此加劇的競(jìng)爭(zhēng)對(duì)專(zhuān)利價(jià)值的影響可能較小，從而使專(zhuān)利發(fā)明具有較高的價(jià)值。如果提高創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，該產(chǎn)業(yè)中的企業(yè)的發(fā)明創(chuàng)造獲得專(zhuān)利保護(hù)的機(jī)會(huì)增加幅度大于專(zhuān)利價(jià)值下降的幅度，從而使該企業(yè)可以獲得更多的經(jīng)濟(jì)利益，進(jìn)而促使企業(yè)進(jìn)一步加大研發(fā)投資，促進(jìn)技術(shù)創(chuàng)新。相反，如果降低創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，則就會(huì)在一定程度上阻礙該類(lèi)產(chǎn)業(yè)的技術(shù)進(jìn)步。當(dāng)然，對(duì)現(xiàn)代技術(shù)，尤其是生物技術(shù)而言，推出有益于競(jìng)爭(zhēng)的新專(zhuān)利技術(shù)需要花費(fèi)較少的時(shí)間，同時(shí)，其他企業(yè)要模仿該技術(shù)或者作出該發(fā)明創(chuàng)造的周邊發(fā)明創(chuàng)造并取得專(zhuān)利保護(hù)需要相對(duì)較短的時(shí)間。由此加劇的競(jìng)爭(zhēng)對(duì)專(zhuān)利價(jià)值的影響可能較大，從而使該發(fā)明的專(zhuān)利的價(jià)值降低。如果提高創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，該產(chǎn)業(yè)中的企業(yè)的發(fā)明創(chuàng)造獲得專(zhuān)利保護(hù)的機(jī)會(huì)增加幅度小于專(zhuān)利價(jià)值下降的幅度，從而使該企業(yè)可以獲得的經(jīng)濟(jì)利益減少，進(jìn)而促使企業(yè)進(jìn)一步減少研發(fā)投資，阻礙技術(shù)創(chuàng)新。相反，如果降低創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，則就會(huì)在一定程度上促進(jìn)該類(lèi)產(chǎn)業(yè)的技術(shù)進(jìn)步，提高創(chuàng)新能力。換句話(huà)說(shuō)，在生物技術(shù)等高科技產(chǎn)業(yè)中，降低可專(zhuān)利性標(biāo)準(zhǔn)，尤其是創(chuàng)造性標(biāo)準(zhǔn)，會(huì)使得取得專(zhuān)利保護(hù)的可能性的增加小于專(zhuān)利價(jià)值下降的幅度，從而刺激新的研發(fā)投資，提高創(chuàng)新能力，取得更多的創(chuàng)新成果。

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