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時間：2023-12-27 10:31:39
序論：好文章的創(chuàng)作是一個不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇免疫學(xué)研究進展范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。
許多流行病學(xué)調(diào)查提示白癜風(fēng)的發(fā)生具有明顯的家族聚集性，遺傳模式并不遵守孟德爾遺傳規(guī)律[1]，而是一種多基因或多因素遺傳疾病，因此其免疫學(xué)遺傳背景也呈現(xiàn)出多樣化。HLA II類等位基因常與白癜風(fēng)有關(guān)，尤其是HLA DR4與其關(guān)系較為密切。涉及抗原遞呈及加工的基因也出現(xiàn)在白癜風(fēng)中，如低分子量多肽1/7（LMP-1/7）、抗原遞呈轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白1/2(TAP-1/2) [2]。細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4（CTLA-4）通過下調(diào)T淋巴細(xì)胞的激活從而控制T細(xì)胞凋亡及抑制免疫反應(yīng)，而某些CTLA-4多態(tài)性與白癜風(fēng)有關(guān)，但只發(fā)生在伴有其他免疫疾病的白癜風(fēng)中，提示白癜風(fēng)的免疫機制可能并不與所有白癜風(fēng)的發(fā)生有關(guān)[3]。多項研究利用全基因組關(guān)聯(lián)分析研究白癜風(fēng)及其他自身免疫疾病的家族鑒定出白癜風(fēng)免疫易感基因座包括染色體1、7、8及17分別命名為AIS1、AIS2、AIS3及SLEV1[4]。最近張學(xué)軍等[5]在人類基因組的3個區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)與白癜風(fēng)發(fā)病密切相關(guān)的基因，包括人類白細(xì)胞抗原（HLA）B/C和III區(qū)域的2個等位基因及相應(yīng)的單倍型（H1和H5）、6號染色體區(qū)域的RNASET2，F(xiàn)GFR1OP和CCR6、10號染色體區(qū)域的ZMIZ1，其中HLA基因及CCR6與人類自身免疫病發(fā)生密切相關(guān)，該研究成果在國際上首次明確白癜風(fēng)屬自身免疫性疾病。
臨床觀察也表明，多數(shù)泛發(fā)型白癜風(fēng)常常與其他自身免疫性疾病并發(fā)，更直觀地支持該病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。已報道的與白癜風(fēng)相關(guān)的自身免疫疾病包括：自身免疫甲狀腺疾病、自身免疫多內(nèi)分泌綜合癥I/II、I型糖尿病，Adisson'綜合癥、斑禿、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病以及肌無力等，但以自身免疫甲狀腺疾病的伴發(fā)率最高。Alkhateeb 等[6]調(diào)查了2624名畢加索白癜風(fēng)患者，發(fā)現(xiàn)30%的患者至少伴發(fā)一種其他自身免疫疾病，而以自身免疫性甲狀腺病最多（19.4%）。另外兩項研究分別涉及80例土耳其患者和144例日本患者，結(jié)果顯示分別有55%和23.5%的白癜風(fēng)患者伴發(fā)其他自身免疫疾病，同樣是自身免疫甲狀腺疾病的伴發(fā)率最高[7-8]。Uncu 等[9]進一步分析了兒童白癜風(fēng)與自身免疫性甲狀腺炎的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)8%的患兒（均為女孩）伴發(fā)自身免疫性甲狀腺炎（對照組0%，P=0.041），而在家族性白癜風(fēng)中，這種情況更為明顯。Greggory[10]研究了133個泛發(fā)型白癜風(fēng)家族，即多家族成員發(fā)生泛發(fā)型白癜風(fēng)，指出其家族成員發(fā)生白癜風(fēng)[21.5±15.0）歲，中位數(shù)18.5]相較于隨機選擇的白癜風(fēng)患者[（24.2±16.2)歲，中位數(shù) 22.0]發(fā)病年齡更小。36.8%的先證者同時伴發(fā)其他自身免疫疾病，頻率最高的疾病仍為自身免疫性甲狀腺疾病（22.6%）。此外，在這些家族中，患者同胞發(fā)展其他自身免疫疾病的頻率也較高（37.5%），而尤其見于先證者同時伴發(fā)其他自身免疫疾?。?1%）。這些都反映出白癜風(fēng)作為多自身免疫疾病的重要成員，可能與其他自身免疫疾病具有相同的遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
2細(xì)胞因子
細(xì)胞因子與相應(yīng)的受體結(jié)合，在介導(dǎo)天然免疫和適應(yīng)性免疫、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方面起著重要作用。多項研究檢測了白癜風(fēng)中細(xì)胞因子表達變化,結(jié)果表明白癜風(fēng)外周血單核細(xì)胞表達IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α明顯增高[11-12]，并且IL-1α、IL-6、IFN-γ及TNF-α表達在白癜風(fēng)皮損區(qū)均上調(diào)[13-14]?？扇苄訧L-2R（sIL-2R）和IL-17在患者外周血及皮損中均增高，且外周血sIL-2R在進展期中表達高于穩(wěn)定期，外周血及皮損中IL-17表達均與疾病持續(xù)時間和程度呈正相關(guān)，外周血中IL-17水平還與疾病受累面積呈正相關(guān)[15-17]。細(xì)胞因子表達在不同型別的白癜風(fēng)中也有所不同，如尋常型（局灶型及泛發(fā)型）白癜風(fēng)患者血中IL-6、GM-CSF表達高于節(jié)段型白癜風(fēng)[18]。這些前炎癥因子的表達增高，在趨化中性粒細(xì)胞至皮損區(qū)、促進白細(xì)胞-黑素細(xì)胞粘附、激活細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞等過程中發(fā)揮重要作用，從而加速免疫損傷推動疾病的進程。IL-17作為一個較新的細(xì)胞因子，可能與TH1型T淋巴細(xì)胞協(xié)調(diào)誘導(dǎo)自身免疫疾病。此外由于調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能調(diào)控初始CD4+T淋巴細(xì)胞向TH17型T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化并產(chǎn)出IL-17，IL-17與白癜風(fēng)的特殊關(guān)系可間接反映出調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能異常[19]。
Grimes等[20]利用他克莫司軟膏外用治療白癜風(fēng)皮損24周后，原脫色區(qū)及鄰近部位TNF-α的表達明顯下降(P ＜0.001)，而在另一項他克莫司研究中，白癜風(fēng)患者治療12周后，除了臨床癥狀得到改善，平均皮損縮小(41.0±5.2）%，治療皮損IL-10表達較未治療皮損（P=0.017）及正常皮膚（P=0.004）均明顯增高[21]，這些研究均表明皮膚局部炎癥因子的失衡在白癜風(fēng)發(fā)生中起到一定作用，糾正細(xì)胞因子的表達有利于白癜風(fēng)的復(fù)色。雖然白癜風(fēng)中外周血及皮損區(qū)細(xì)胞因子表達變化在不同研究中結(jié)果有所差異，但是總體傾向于TH1型炎癥因子。逆轉(zhuǎn)TH1型細(xì)胞因子向TH2型變化不僅是他克莫司治療白癜風(fēng)的機制之一，同時也體現(xiàn)出TH1型細(xì)胞因子及其介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)發(fā)病中起到較大的作用。
3細(xì)胞免疫
3.1 外周血T淋巴細(xì)胞：白癜風(fēng)外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及比例在不同的文獻中存在較大差異，這可能與研究人群及疾病特征有關(guān)，如疾病的活動性及伴有其他免疫疾病可能影響外周血細(xì)胞比例及分類。早期一項研究表明隨機選擇的白癜風(fēng)中CD4+T細(xì)胞數(shù)量及CD4+/CD8+ T細(xì)胞較正常人明顯下降（P＜0.01）[22]，而近期一項研究分析了40例非節(jié)段性白癜風(fēng)（其中21例患者為活動期，19例為穩(wěn)定期）的外周血淋巴細(xì)胞亞群，發(fā)現(xiàn)CD3+、 CD4+、CD8+ T細(xì)胞計數(shù)沒有改變，而CD4+/CD8+ 上升（其中位數(shù)為2.6，正常值2.4）[23]。這些研究結(jié)果都表明白癜風(fēng)與淋巴細(xì)胞失衡密切相關(guān)。另外，兩項研究比較了非節(jié)段性白癜風(fēng)患者與正常人外周血中T細(xì)胞亞群變化，結(jié)果均示CD45RA+T細(xì)胞明顯下降，而CD45RO+T細(xì)胞明顯增高[24-25]，表明白癜風(fēng)外周血中T細(xì)胞呈激活記憶狀態(tài)，也反映了免疫機制在白癜風(fēng)中起到一定作用。Basak[26]的研究同樣表明白癜風(fēng)患者CD45RO+T細(xì)胞較正常人增多（P=0.022）, 并且CD45RO+ 細(xì)胞在伴有自身免疫疾病的白癜風(fēng)患者中的表達明顯高于無其他自身免疫疾病的患者(P=0.042)，同樣的結(jié)論在有家族史的患者中得到體現(xiàn)(P＜0.001)。因此，在白癜風(fēng)患者外周血中，淋巴細(xì)胞普遍以記憶T淋巴細(xì)胞形式存在，并且當(dāng)伴有其他免疫因素下表現(xiàn)更為明顯，反映出白癜風(fēng)患者的免疫系統(tǒng)在某些抗原信息的刺激下已呈激活狀態(tài)。此外，多項研究利用黑素細(xì)胞分化抗原，Melan-A/MART、gp100及tyrosinase，在HLA-A2 限制性的白癜風(fēng)患者外周血中均檢測到特異的CD8+T淋巴細(xì)胞，這些細(xì)胞與疾病的活動性成正相關(guān)，不僅能特異性識別黑素細(xì)胞分化抗原，表達歸巢受體CLA，對黑素細(xì)胞有較高的親和力，同時能在體外對黑素細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒作用[27-29]，特異CD8+T淋巴細(xì)胞的存在與TH1型細(xì)胞因子表達增高相一致，均體現(xiàn)了細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)病因?qū)W中的重要性。
3.2 局部浸潤T淋巴細(xì)胞：雖然在不同研究中，白癜風(fēng)患者外周血中淋巴細(xì)胞的分類存在差異，但在皮損局部的淋巴細(xì)胞浸潤模式較為統(tǒng)一，即泛發(fā)型白癜風(fēng)中，皮損及皮損周圍以CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤為主。有報道利用免疫組化技術(shù)分析了白癜風(fēng)局部皮損的免疫浸潤模式，發(fā)現(xiàn)在圍皮損區(qū)T淋巴細(xì)胞的浸潤最為顯著。在圍皮損區(qū)表皮基底層及真皮周圍等尚殘存黑素細(xì)胞的部位，大部分T淋巴細(xì)胞為CD45RO+，且主要為CD8+T淋巴細(xì)胞（平均CD4 /CD8:0.48），其數(shù)量較正常皮膚明顯增多（P＜0.005）。利用NKI-beteb/CD8標(biāo)記免疫組化，檢測到CD8+T淋巴細(xì)胞位于黑素細(xì)胞及其殘體周圍，表達歸巢受體CLA，而與黑素細(xì)胞接觸的CD8+T淋巴細(xì)胞多數(shù)表達穿孔素（66±14）%及顆粒酶（60±34）%[30]。因此研究者認(rèn)為皮膚歸巢的CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒作用成了白癜風(fēng)重要的發(fā)病機制。
體外分離白癜風(fēng)圍皮損區(qū)T淋巴細(xì)胞，結(jié)果提示其浸潤的T淋巴細(xì)胞主要為CD8+T淋巴細(xì)胞。利用非特異性刺激后，圍皮損區(qū)來源的T淋巴細(xì)胞分泌INF-γ、TNF-α 等TH1型細(xì)胞因子，而正常皮膚來源的T淋巴細(xì)胞無此模式，因此，更進一步支持了白癜風(fēng)趨向于TH1免疫類型。此外，分離培養(yǎng)的CD8 T淋巴細(xì)胞能對自身來源的黑素細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞毒作用，利用抗HLA I抗體阻斷這種作用，證實白癜風(fēng)中CD8+T淋巴細(xì)胞對黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)是HLA限制性的[31]。Van den Boorn[32]在前人的研究基礎(chǔ)上進行了擴大研究，表明T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷導(dǎo)致黑素細(xì)胞的丟失，而并非是各種因素的作用結(jié)果。圍皮損區(qū)分離培養(yǎng)的T淋巴細(xì)胞及外周血單核細(xì)胞能以HLA限制性方式特異性識別黑素細(xì)胞分化抗原構(gòu)成的肽四聚體（酪氨酸酶、gp100、melan A/MART-1），并表達CD69、CD137、顆粒酶B、CD107a及TH1細(xì)胞因子INF-γ、TNF-α。但正常人皮膚來源的T淋巴細(xì)胞和流感抗原刺激下的任何T淋巴細(xì)胞均不能表達上述分子。提示白癜風(fēng)中T淋巴細(xì)胞能特異性識別黑素細(xì)胞分化抗原并激活。將皮膚移植塊與自體培養(yǎng)的圍皮損來源的完全成分的T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞、清除了CD8+T淋巴細(xì)胞后的細(xì)胞共培養(yǎng)后，在前兩種共培養(yǎng)模式下檢測到大部分黑素細(xì)胞的凋亡，伴少量角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，而后者共培養(yǎng)僅檢測到少量黑素細(xì)胞凋亡，表明了在白癜風(fēng)中主要是CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)了黑素細(xì)胞的缺失。由于角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡并未發(fā)生在不含黑素細(xì)胞的皮損區(qū)，角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡僅僅是旁效應(yīng)作用，因此CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用依賴于特異性的黑素細(xì)胞抗原。利用激光掃描共聚焦顯微鏡，觀察到CD8+T淋巴細(xì)胞浸潤到表皮及真皮，造成表真皮連接的損害及黑素細(xì)胞的丟失。因此,該研究證實了CD8+T淋巴細(xì)胞能特異性識別黑素細(xì)胞分化抗原并進一步激活，浸潤至黑素細(xì)胞周圍發(fā)揮細(xì)胞毒作用，從而介導(dǎo)細(xì)胞免疫效應(yīng)，更為直接的論證了CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫機制在白癜風(fēng)發(fā)病中的重要作用。在這個過程中，涉及大量的細(xì)胞因子和復(fù)雜的調(diào)節(jié)機制，都可能成為免疫治療的研究方向。
3.3 調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞：盡管已表明CD8+T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在白癜風(fēng)中發(fā)揮重要作用，但是僅存在CD8+T淋巴細(xì)胞并不能維持泛發(fā)性白癜風(fēng)的發(fā)生。人體調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)會利用反饋機制對抗異常的免疫反應(yīng)，如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能通過細(xì)胞因子TGF-β抑制自身反應(yīng)的免疫反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者外周血中TGF-β較正常人明顯降低(P=0.004)，推測白癜風(fēng)中調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的功能可能受損，而不能抑制過激的免疫反應(yīng)，造成自身免疫損傷[33]。而Klarquist等[34]比較了白癜風(fēng)患者皮膚的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞在浸潤淋巴細(xì)胞中的比例，發(fā)現(xiàn)不論在非皮損區(qū)(2.6±3.5)%，圍皮損區(qū)(2.0±1.6)%還是皮損區(qū)(7.3± 13.9)%，白癜風(fēng)患者皮膚中的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞較正常人皮膚(46.2±37.8)%明顯降低。通過檢測對抗CD4+T細(xì)胞增殖能力，發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞功能并未受損，細(xì)胞表達的趨化因子受體CCR4、CCR5、CCR8 及CLA也未存在異常。而白癜風(fēng)皮膚中趨化因子CCL22表達比正常人皮膚降低了43%，因此作者推測趨化因子CCL22的降低可能導(dǎo)致白癜風(fēng)皮膚中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞表達降低，從而不能調(diào)控免疫反應(yīng)。在白癜風(fēng)中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是否存在功能異常，其作用地位如何仍需要進一步研究。
4 體液免疫
在白癜風(fēng)外周血中常常檢測到自身抗體的存在。這些抗體的靶抗原包括黑素小體內(nèi)的酪氨酸酶、gpl00、酪氨酸酶相關(guān)蛋白(TRP-1/2) 以及黑素集合激素受體1 (MCHR1)等，其中MCHR1是較新發(fā)現(xiàn)的B細(xì)胞的自身抗原，可表達于黑素細(xì)胞表面。研究表明MCHR1抗體能阻斷該受體對黑素集合受體(MCH)的反應(yīng)，從而影響黑素細(xì)胞功能及黑素生成[35]。而MCHR1抗體是否與白癜風(fēng)發(fā)病有直接關(guān)系仍需要進行深入研究。
白癜風(fēng)涉及的抗體主要為IgG，包括IgG1、IgG2 及IgG3。最近一項研究分析了白癜風(fēng)患者血清免疫球蛋白譜，發(fā)現(xiàn)IgG和IgA水平明顯降低(P＜0.05)，但是IgM沒有變化，并且IgG的濃度與脫色斑數(shù)量有關(guān)。進一步表明了IgG可能涉及白癜風(fēng)發(fā)病[36]。利用DNA含量測定，白癜風(fēng)來源的IgG（32.16±6.24）%較正常來源的IgG(1.33±0.82）%能誘導(dǎo)更多的黑素細(xì)胞凋亡（P＜ 0.0001)。將黑素細(xì)胞與IgG共培養(yǎng)后，白癜風(fēng)來源的IgG(62.66±8.68）%也較正常來源 IgG (1.83±1.17）%更能滲透入黑素細(xì)胞（P＜0.0001）[37]。這些結(jié)論表明各種抗體不僅能以ADCC作用方式介導(dǎo)黑素細(xì)胞損傷，同時可能滲透入細(xì)胞內(nèi)而誘導(dǎo)其凋亡。
白癜風(fēng)中抗體的表達還與疾病活動性及嚴(yán)重度有關(guān)，在一項研究中，利用酶聯(lián)免疫法，抗黑素細(xì)胞IgG在80%的活動性白癜風(fēng)外周血中表達，而在穩(wěn)定期白癜風(fēng)及健康者中未出現(xiàn)。而另一研究組利用免疫共沉淀法檢測到在輕（受累面積＜2%）、中（受累面積2%～5%）、重（受累面積＞5%）患者外周血中IgG出現(xiàn)率分別為50%、90%及93%。但也有研究報道白癜風(fēng)中抗黑素細(xì)胞的IgA水平而不是IgG與活動性有關(guān)[38]。雖然白癜風(fēng)中檢測到各種針對黑素細(xì)胞抗原的抗體，但是目前為止還沒有任何一種抗體被認(rèn)為起主要作用，而抗體檢查對于白癜風(fēng)的輔助診斷及疾病進展判斷仍有一定的作用。
5 總結(jié)
白癜風(fēng)屬自身免疫性疾病，其發(fā)生與多個免疫相關(guān)的等位基因密切相關(guān)。外周血及皮損中細(xì)胞因子的表達變化促進了免疫反應(yīng)及炎癥反應(yīng)的進展，尤其是皮損區(qū)TH1型細(xì)胞因子的表達上調(diào)增強了細(xì)胞免疫效應(yīng)。受疾病的活動性等因素影響，外周血中T淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量及比例存在較大的差異，但淋巴細(xì)胞普遍呈激活狀態(tài)。皮損局部浸潤的CD8+T淋巴細(xì)胞能特異性識別黑素細(xì)胞分化抗原，進而激活并介導(dǎo)對黑素細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，是白癜風(fēng)中黑素細(xì)胞丟失的重要原因。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞作為其中的調(diào)節(jié)因素，其數(shù)量在皮損中表達下調(diào)，而功能是否受損仍需要進一步研究。此外，體液免疫也參與了白癜風(fēng)發(fā)病，特異性抗體的檢查不僅能輔助診斷，還能有利于判斷疾病的活動性和嚴(yán)重度?？傊?，免疫學(xué)機制是白癜風(fēng)發(fā)病的重要原因，針對各個環(huán)節(jié)開展的治療方法，如調(diào)節(jié)異常的細(xì)胞因子水平、抑制淋巴細(xì)胞的激活等有助于疾病的治療。
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伴隨著科技的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進步，免疫學(xué)檢驗技術(shù)有了突飛猛進的發(fā)展。從單一的免疫診斷技術(shù)發(fā)展為微量化、多基因和單細(xì)胞技術(shù)。而一些繼發(fā)性和原發(fā)性免疫缺陷及惡性腫瘤的臨床診斷，往往要求更加精確的免疫學(xué)檢驗技術(shù)，還能對臨床治療的有效性進行定量評價。
1免疫學(xué)檢驗技術(shù)的研究進展
1.1熒光素標(biāo)記抗體技術(shù)
1.1.1流式細(xì)胞免疫熒光分析技術(shù)這是一種新型的血清試驗方法，它是在免疫熒光基礎(chǔ)上建立起來的，對抗體利用熒光進行染色，并在此基礎(chǔ)上對所需信息進行獲取，進而研制而成的流式細(xì)胞儀。其特征是擁有電子計算機技術(shù)和激光技術(shù)，主要是用于分析DNA含量，可在同一試管中，對多種靶物質(zhì)的潛在特征進行檢測。目前這種技術(shù)盡管還沒有應(yīng)用于臨床上，但卻受到許多臨床檢驗學(xué)者的關(guān)注。
1.1.2間接免疫熒光技術(shù)主要是檢測呼吸道病原體抗體、抗平滑肌抗體和抗病原體，可使自動化程度和標(biāo)準(zhǔn)化檢測提高，并使手工操作的誤差降低。這是一種相對成熟的技術(shù)，可用于商品的開發(fā)。
1.2酶標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)
1.2.1酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)在檢測酶聯(lián)免疫技術(shù)上，從理論上分析，相應(yīng)的抗體或者是某一抗原純品都可以進行應(yīng)用，所以在該技術(shù)的檢測上，抗體系統(tǒng)或者是可融性抗體都可以采納。這種技術(shù)是以免疫過氧化物為基礎(chǔ)，有較強的特異性、較高的敏感性，便于觀察、操作簡單，已經(jīng)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，利于進行大規(guī)模的檢查。
1.2.2酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)這是一種分析技術(shù)，應(yīng)用于對B細(xì)胞分泌免疫球蛋白的測定，是進一步衍伸和發(fā)展了定量酶聯(lián)免疫吸附試驗技術(shù)。微孔內(nèi)進入待檢測樣本后進行培養(yǎng)，在特異性抗原的作用下，對B細(xì)胞或者是記憶型T細(xì)胞進行活化，產(chǎn)生了IG或者是CK，清洗細(xì)胞之后，將第二抗體加入，IG或CK與抗體結(jié)合之后，在將酶生物素加入，發(fā)生反應(yīng)，而形成大小不一的圓形著色斑點。此技術(shù)即可用于各類CK的T細(xì)胞的分泌，還可用于抗體B細(xì)胞的分泌，這種技術(shù)也是檢測T細(xì)胞功能的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，其檢測靈敏度相當(dāng)高。
1.3新型標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)
1.3.1核酸標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)其原理是轉(zhuǎn)錄翻譯或者是擴增核酸。在極短的時間內(nèi)，通過聚合酶鏈反應(yīng)，按照幾何數(shù)在擴增，最終達到數(shù)百萬倍，這就是擴增。而轉(zhuǎn)錄翻譯是通過抗體DNA發(fā)生抗原反應(yīng)后，測定轉(zhuǎn)錄翻譯成的酶。靈敏性強是這兩種檢測方法的共同特征，目前，此種方法仍舊用于研究階段。
1.3.2量子點標(biāo)記免疫檢驗技術(shù)在傳統(tǒng)的標(biāo)記免疫分析技術(shù)中，有較低的酶免疫分析靈敏度，同時有很大的污染存在于放射免疫分析中，而熒光免疫分析和發(fā)光免疫分析都有著較短的發(fā)光時間，很容易發(fā)生淬滅。而在20世紀(jì)70年代，科學(xué)家們就開始廣泛關(guān)注良好的光電性能，并開始初步應(yīng)用標(biāo)記免疫分析，其效果也非常令人滿意。量子由于有很小的尺寸，在受到刺激時，會發(fā)生熒光，所以它實際上是起到了探針的作用。在早期診斷疾病、細(xì)胞成像、測定生物多組分和免疫示蹤定位時，其應(yīng)用價值非常廣泛。
2其他免疫檢驗技術(shù)
2.1微陣列免疫芯片技術(shù)這是一種小分子抗原分析平臺，具有高效的特征，是近年來剛剛出現(xiàn)的，它可以對復(fù)雜樣品中含量極低的目標(biāo)物質(zhì)進行快速的定量檢測。同時，還可對生物樣品中全部蛋白質(zhì)含量的變化情況進行檢測。其優(yōu)點是能夠進行高通量的平行檢驗與分析，可使樣本或藥品的用量降低。
2.2液態(tài)芯片技術(shù)是新一代生物芯片技術(shù)，在20世紀(jì)70年代美國Luminex公司研制，其檢測平臺是流式細(xì)胞技術(shù)，其載體是帶編碼的微球體，可用于大規(guī)模的測定蛋白質(zhì)和核酸。還可用于檢測多種指標(biāo)，包括傳染病、神經(jīng)―內(nèi)分泌等，可用于測試任何使用微量分析的系統(tǒng)。
3免疫學(xué)檢驗技術(shù)的發(fā)展趨勢
科學(xué)技術(shù)的發(fā)展和醫(yī)學(xué)的進步，要求能夠準(zhǔn)確分析從特定部位取得的微量樣本。隨著微納電子學(xué)及分子生物學(xué)的發(fā)展，在科研上免疫學(xué)檢驗技術(shù)也有了質(zhì)的飛躍，在此趨勢下，將不斷應(yīng)用各種更為敏感的新的分析方法，使免疫學(xué)檢驗技術(shù)朝著更新、更高的方向發(fā)展。
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中圖分類號：S852.4 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：1007-273X（2013）11-0064-02
乳酸桿菌是革蘭氏陽性菌，不形成芽孢，因能發(fā)酵乳酸而得名。乳酸桿菌不僅已廣泛應(yīng)用于畜牧業(yè)、食品加工業(yè)，隨著醫(yī)學(xué)研究的深入，在疾病治療和預(yù)防也得以應(yīng)用。肽聚糖是乳酸桿菌細(xì)胞壁的主要成分，真核細(xì)胞中不含肽聚糖，因此肽聚糖成了真核生物免疫系統(tǒng)識別的理想靶位。DNA是乳酸桿菌的遺傳物質(zhì)，對高等動物免疫系統(tǒng)具有免疫刺激作用。菌體外膜蛋白（outer membrance protein，OMP）是乳酸桿菌細(xì)胞膜的一種外膜蛋白，OMP具有良好的免疫原性，不僅可刺激體液免疫，而且可以刺激細(xì)胞免疫作用。
1 乳酸桿菌
1.1 乳酸桿菌簡介
乳酸桿菌是指能使糖類發(fā)酵產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌，其存在廣泛，嗜酸性，最適合pH 5.5～6。在pH 3.0～4.5中仍然能生存，在無芽孢桿菌中其耐酸力最強。酸牛奶中有此菌，是一群生活在機體內(nèi)益于宿主健康的微生物，它維護人體健康和調(diào)節(jié)免疫功能的作用已被廣泛認(rèn)可。具有控制腸內(nèi)感染、抗腫瘤活性等，還能促進小腸局部細(xì)胞免疫和體液免疫。
1.2 乳酸桿菌近期研究成果
國內(nèi)外有大量飼養(yǎng)和臨床試驗證明乳酸桿菌對人和動物都有保健和治療功效，乳酸桿菌活菌膠囊陰道置入對產(chǎn)婦局部微環(huán)境有調(diào)整作用，能有效改善產(chǎn)后女性陰道菌群失調(diào)狀態(tài)，使其接近正常女性陰道微環(huán)境[1]；在種蛋雞產(chǎn)蛋期飼糧中添加復(fù)合乳酸桿菌制劑可以提高種蛋雞的產(chǎn)蛋率和對飼糧中粗蛋白的表觀消化率和改善免疫機能以及顯著提高乳酸菌和雙歧桿菌的數(shù)量[2]；乳酸桿菌通過定制和提供免疫信號調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)[3]；Korshunov等[4]通過研究39例HPV感染伴CIN的婦女陰道分泌物情況，發(fā)現(xiàn)陰道內(nèi)乳酸桿菌的減少與宮頸癌前病變的發(fā)生密切相關(guān)，而且乳酸桿菌減少，各種條件致病菌增多，為HPV發(fā)揮作用提供了環(huán)境。
2 乳酸桿菌免疫
2.1 乳酸桿菌肽聚糖的免疫
2.1.1 乳酸桿菌肽聚糖 乳酸桿菌肽聚糖（peptidoglycan，PG）它是由雙糖單位、四肽尾還有肽橋聚合而成得多層網(wǎng)狀大分子結(jié)構(gòu)，N -乙酰葡萄糖胺（N-acetylglucosamine， NAG）和N-乙酰胞壁酸（N-acetylmuramic acid， NAMA）交替連接的雜多糖與不同組成的肽交叉連接形成的大分子。肽聚糖占細(xì)菌干重的50%～80%由N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰胞壁酸通過β-1，4糖苷鍵連接而成，糖鏈間由肽鏈交聯(lián)，構(gòu)成穩(wěn)定的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。
2.1.2 乳酸桿菌肽聚糖免疫增強作用 乳酸桿菌肽聚糖等免疫調(diào)節(jié)劑引起的免疫調(diào)節(jié)反應(yīng)是大量蛋白共同作用的結(jié)果，孫進等通過分析實驗證實了乳酸桿菌肽聚糖引起了核糖體相關(guān)蛋白的明顯變化[5]。這種表現(xiàn)主要表現(xiàn)在以下幾個個方面，首先，乳酸桿菌肽聚糖刺激后引起TH細(xì)胞激活，T細(xì)胞表面分子的表達被誘導(dǎo)，同時，第一信號系統(tǒng)和第二信號系統(tǒng)被激活。第二，特定炎性因子表達增強或減弱，及某些抗炎性因子表達上調(diào)[6]。
2.2 乳酸桿菌DNA的免疫
2.2.1 乳酸桿菌DNA 乳酸桿菌DNA是一條雙股環(huán)狀DNA分子組成，附著在橫隔中介體或細(xì)菌膜上。細(xì)菌染色體無組蛋白包繞。細(xì)菌染色體上的基因與真核細(xì)菌不同，無內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后形成的mRNA不必再剪切、拼接，可直接翻譯成多肽。乳酸桿菌胞質(zhì)中還存在著一種小型環(huán)狀DNA分子-質(zhì)粒，質(zhì)粒能攜帶2～200個基因，可進行自我復(fù)制。
2.2.2 乳酸桿菌DNA的免疫增強作用 乳酸桿菌DNA對免疫有增強作用，其原因可能與其他細(xì)菌DNA的作用相似，其免疫活性部位為非甲基化胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸（CPGdinucleotides）的特定結(jié)構(gòu)，即以CpG為核心，3'端緊接2個嘧啶，簡寫為5'-PuPuCpGpPyPy-3'。據(jù)報道，CpG-DNA可直接激活巨噬細(xì)胞分泌IL-12和TNF-α[7]。單核細(xì)胞受細(xì)菌DNA刺激后，IL-6、IL-12和TNF-α等細(xì)胞因子分泌增加，MHC-I與MHC-II類抗原表達增加，共刺激信號CD86與CD40表達增加，抗原提呈功能增強[8]。CpG-DNA還可延長抗原提呈細(xì)胞的存活期，乳酸桿菌DNA可直接或間接地促進NK細(xì)胞的功能。
2.3 乳酸桿菌OMP的免疫
2.3.1 乳酸桿菌OMP 乳酸桿菌外膜蛋白不是由跨生物膜的α螺旋組成，而是由反平行的β桶結(jié)構(gòu)組成，不同的外膜蛋白的β-桶由不同偶數(shù)個β-折疊片組成，從8個到22個不等。外膜鑲嵌蛋白有多種功能，例如細(xì)菌粘附、溶解和蛋白運輸，以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。細(xì)菌的OMP通過抗吞噬、抗補體及抗血清殺菌作用而對細(xì)菌的致病過程起著非常重要的影響。
2.3.2 乳酸桿菌OMP的免疫增強作用 外膜蛋白可作用于參加免疫反應(yīng)的細(xì)胞，OMP 通過加強巨噬細(xì)胞對抗原的攝取，增強了淋巴細(xì)胞的活化，表現(xiàn)出在免疫反應(yīng)中的重要作用。用鼠傷寒桿菌OMP 50μg免疫小白鼠即可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體并保護500 LD50細(xì)菌量的攻擊，同時OMP還可誘導(dǎo)產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng)，表明OMP具有較強的免疫原性和細(xì)胞免疫能力。
3 乳酸桿菌的免疫學(xué)應(yīng)用前景
2株乳酸桿菌L.casei Zhang和MG-1的肽聚糖作為佐劑可明顯促進新城疫油乳劑滅活疫苗和禽流感（H5）亞型油乳劑滅活疫苗對雛雞的免疫效果，并隨著肽聚糖添加量的增加抗體滴度也增加[9]。乳酸桿菌L.casei Zhang DNA作為佐劑可明顯促進新城疫油苗和禽流感（H5）亞型油苗對雞的免疫效果，增強雞的細(xì)胞與體液免疫應(yīng)答[10]。乳酸桿菌菌體OMP具有良好的免疫原性可刺激體液免疫和細(xì)胞免疫作用，顯著提高了新城疫疫苗的免疫效果和抵抗相應(yīng)強毒的攻擊[11]。
乳酸桿菌在免疫學(xué)方面的開發(fā)有非常中的作用，對家禽的疫苗免疫增強作用已得到證實，對蛋雞和肉種雞的健康成長有重要作用，乳酸桿菌的三類免疫增強劑可在禽類傳染病防治中進一步加以推廣，對其他動物免疫增強劑也提供了可以研究及應(yīng)用的前景。
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乙型肝炎(HB)是一種世界范圍內(nèi)流行的傳染病。據(jù)估計，全球約20億人曾經(jīng)感染HB病毒(HBV)，慢性感染者約有3.5～4億人，每年有100萬人死于HBV所致的肝硬化、肝衰竭及原發(fā)性肝癌〔1〕。我國為HB高發(fā)國家，人群HBV感染率約為9.09%〔2〕，HB已成為嚴(yán)重的社會問題。HBV感染和機體的免疫狀態(tài)密切相關(guān)，兒童期HBV感染，約90%發(fā)展成為慢性感染，而青少年及成年期感染，僅有10%發(fā)展成慢性感染。隨著年齡老化，手術(shù)及輸血的機會增多，以及老年人臟器特有的變化，導(dǎo)致老年人慢性HBV感染機會明顯增加。
1 HBV的特點
HBV屬于嗜肝DNA病毒，其完整的病毒顆粒成為Dane顆粒，直徑42 nm，由雙層外殼和一個核心組成。核心直徑為27 nm，內(nèi)含環(huán)狀雙股DNA，DNA聚合酶、核心蛋白〔3〕。外部為包膜蛋白，厚約7 nm，即表面抗原。其基因組由S區(qū)、C區(qū)、X區(qū)和P區(qū)組成。S區(qū)編碼前S1蛋白、前S2蛋白及乙肝病毒表面抗原(HBsAg)。前S蛋白有很強的免疫原性。在HBV的附著和侵入宿主肝細(xì)胞的機制中起著重要的作用。前S1和前S2蛋白可引出和調(diào)節(jié)宿主的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答，對于清除體液內(nèi)的病毒和阻止病毒感染健康的肝細(xì)胞提供重要的免疫防御機制。C區(qū)由前C基因和C基因組成，前C基因編碼的蛋白質(zhì)經(jīng)加工后分泌到細(xì)胞外形成乙肝病毒e抗原(HBeAg)，C基因編碼的蛋白質(zhì)為HBcAg。目前認(rèn)為HBcAg是宿主Tc(細(xì)胞毒T細(xì)胞)作用的主要靶抗原。P區(qū)是最長的開放性讀碼框，編碼多種功能性蛋白，包括逆轉(zhuǎn)錄酶/DNA聚合酶、RNA酶等，參與HBV的復(fù)制。X基因編碼X蛋白，可激活多種調(diào)控基因，與原發(fā)性肝癌的發(fā)生密切相關(guān)。
2 HBV感染的免疫學(xué)機制
一般認(rèn)為HBV不直接損害肝細(xì)胞，而是通過宿主的免疫應(yīng)答和反應(yīng)引起肝細(xì)胞的損傷和破壞。宿主免疫反應(yīng)的不同，直接影響HBV感染所致的轉(zhuǎn)歸。HBV感染后，機體清除HBV的機制主要包括特異性體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，以及非特異性免疫反應(yīng)。
2.1 急性HB的免疫機制 HBV感染肝細(xì)胞后，病毒抗原被抗原提呈細(xì)胞(APC)的蛋白酶體裂解成小分子的寡肽，并與肝細(xì)胞內(nèi)人類白細(xì)胞抗原(HLAI)類分子結(jié)合成復(fù)合物，表達于細(xì)胞表面，成為T細(xì)胞表位。CTL通過表面的CD8+分子與HLAI類分子產(chǎn)生黏附，并由TCR識別上述寡肽表位，此類CTL即為HBV抗原特異性CTL(HBV antigens Specific cytotoxic lymphocytes，HBVsCTL)。HBV特異性的CTL通過分泌大量的γ干擾素(IFNγ)等細(xì)胞因子達到清除病毒的作用。在自限性急性乙型肝炎患者中，特異性CTL應(yīng)答作用強，可能與病毒被迅速清除而肝細(xì)胞損傷較輕有關(guān)，而在老年患者中，胸腺老齡退化，T細(xì)胞活性下降，其亞群分布發(fā)生改變，導(dǎo)致CTL活性和殺傷力明顯下降，導(dǎo)致肝炎慢性化〔4〕。
2.2 HBV感染慢性化的免疫機制
2.2.1 天然免疫 樹突狀細(xì)胞(dendritic cells， DCs)，是至今發(fā)現(xiàn)的功能最為強大的專職APC，是機體對異己抗原發(fā)生免疫應(yīng)答的首要環(huán)節(jié)〔5〕。根據(jù)其細(xì)胞表面的標(biāo)志可分為髓樣樹突狀細(xì)胞(myeloid dendritic cell，mDC)和漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC)。pDC在宿主對病毒的防御機制中起到重要的作用，并具有大量分泌Ⅰ型干擾素的能力。DCs既是天然免疫的重要組成部分，可通過Toll樣受體(Toll like receptor，TLR)識別病原相關(guān)分子模式(pathogen associated molecular pattern，PAMP)而觸發(fā)，分泌IFN、白介素(IL)等細(xì)胞因子，促進DCs自身成熟的同時，對病原體進行原始?xì)?〕。同時，DCs也是連接天然免疫和獲得性免疫的橋梁。成熟的DC表面高表達HLADR，CD86(B71)，CD80(B72)等共刺激分子，可高效激活未致敏T淋巴細(xì)胞，發(fā)揮特異性細(xì)胞免疫〔7〕。因此，DC的功能狀態(tài)、表達的TLR對機體天然免疫以及獲得性免疫起到關(guān)鍵作用。大量研究表明，老年慢性乙型病毒性肝炎患者外周血DCs存在表型缺陷，成熟障礙，功能下調(diào)〔8〕，不能有效將外來抗原有效遞呈給T淋巴細(xì)胞，而致不能及時有效啟動特異性免疫，清除HBV，最終導(dǎo)致HBV感染持續(xù)化。
Toll受體為Ⅰ型跨膜糖蛋白，識別特異性高度保守分子，可以表達在胞膜及胞內(nèi)，已知人的TLR受體有11種。其中TLR 2、4、5表達在細(xì)胞表面，TLR3、7、8表達在內(nèi)涵體和溶酶體膜，TLR9表達在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，活化后進入內(nèi)涵體和溶酶體〔9〕。其中TLR 3、7、8、9參與了抗病毒的天然免疫反應(yīng)〔10，11〕它在天然免疫中通過對病源分子相關(guān)模式(PAMP)的識別發(fā)揮作用，通過刺激信號的級聯(lián)反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞因子的產(chǎn)生和協(xié)同刺激因子的表達，在天然免疫和獲得性免疫中起到了橋梁的作用。大量的研究顯示HBV和天然免疫系統(tǒng)之間存在相互的作用，HBV可干擾Toll樣受體的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，抑制細(xì)胞因子IL10、IFNγ、TNFα的產(chǎn)生，HBV還可引起MD1效應(yīng)分子的表達上調(diào)，進而引起TLR 4的表達下調(diào)，間接抑制TLR為媒介的免疫機制〔12〕，從而引起感染的持續(xù)化。
2.2.2 獲得性免疫 HBV感染機體后，除了早期建立起來的非特異性免疫應(yīng)答外，還有特異性免疫應(yīng)答，而后者更為重要。特異性免疫應(yīng)答主要包括體液反應(yīng)和細(xì)胞反應(yīng)。體液免疫中的特異性抗體主要作用是中和循環(huán)內(nèi)的病毒并阻止病毒感染健康的肝細(xì)胞，老年人B 細(xì)胞的成熟過程明顯減慢，其成熟周期延長，B 細(xì)胞各亞型的活力不同程度地下降，其周轉(zhuǎn)率也呈不同程度的減退;B 細(xì)胞表面免疫球蛋白(Ig)濃度降低，產(chǎn)生抗體活力亦隨增齡而下降，免疫應(yīng)答亦降低〔13〕。細(xì)胞免疫反應(yīng)包括抗原特異的細(xì)胞毒懷淋巴細(xì)胞(TCL)，自然殺傷細(xì)胞(NK)，抗體依賴的細(xì)胞毒細(xì)胞(ADCC)和淋巴因子激活的K細(xì)胞(LAK)等，其中以CTL最為重要〔14，15〕。
HBV特異性細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞(CTL)，通過T細(xì)胞受體(TCR)識別APC(病毒感染的肝細(xì)胞，吞噬病毒抗原的樹突狀細(xì)胞等)表面的主要組織相容性復(fù)合體(Major histocompatibility complex MHC)Ⅰ類分子結(jié)合活化，活化的主要通過以下兩個途徑發(fā)揮作用①溶胞途徑:機體針對HBV編碼產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性T淋巴細(xì)胞，借助其分泌的穿孔素、顆粒酶及其表面表達的Fas配體等使病毒感染的靶細(xì)胞凋亡。②非溶胞途徑:機體針對HBV編碼產(chǎn)物所產(chǎn)生的特異性T淋巴細(xì)胞通過分泌特定的細(xì)胞因子如IFNγ和TNFα來抑制HBV的復(fù)制繼而達到清除病毒的作用〔16〕。CD4+T淋巴細(xì)胞的主要作用是輔助B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體及誘導(dǎo)CTL活化，同時也能增強樹突狀細(xì)胞的活化CD8+效應(yīng)T細(xì)胞的過程，從而清除病毒〔17〕。老年人因胸腺萎縮等原因表現(xiàn)免疫功能低下，而胸腺是主要的免疫器官，是T淋巴細(xì)胞成熟分化的場所，在老年慢性乙肝患者中，雖然T細(xì)胞的總數(shù)沒有發(fā)生明顯的變化，但是其增殖力及活性隨著胸腺的退化而逐漸下降，亞群分布發(fā)生變化，CTL活性及殺傷力受損，引起感染慢性化〔18〕。
3 老年慢性乙型肝炎的特點
HBV感染后慢性化的機制，除了特異性免疫應(yīng)答因素外，尚有許多其他的因素，病毒因素包括病毒的基因型、突變等宿主因素包括宿主的年齡、性別、人白細(xì)胞抗原基因型和免疫應(yīng)答等方面。
3.1 免疫系統(tǒng)退化 60歲以上老年人胸腺組織已不易測到。因此，細(xì)胞免疫功能顯著受損，淋巴細(xì)胞功能受損，B 淋巴細(xì)胞功能也隨之下降，致使體液免疫功能發(fā)生改變。另外，老年人血清免疫球蛋白IgA及l(fā)gG值增加，IgA增高更顯著，而IgM濃度下降，多數(shù)老年人血清中有自身抗體。這也反映老年人免疫系統(tǒng)失調(diào)。
3.2 病毒的變異 隨著HBV感染時間的延長，自身的不斷復(fù)制，以及宿主的免疫壓力、外環(huán)境和藥物的作用下，病毒會形成變異，從而對免疫系統(tǒng)產(chǎn)生新的影響。其中比較常見的是前C區(qū)1896位點的變異，前C基因變異可能影響到抗原的加工、提呈，變異的抗原與HLA形成的復(fù)合物發(fā)生構(gòu)型變化，從而使CD4+T細(xì)胞失去了對復(fù)制病毒的特異性的識別能力，同時也影響CTL對病毒的識別，致使T細(xì)胞免疫作用下降。Bertoletti等〔19〕研究發(fā)現(xiàn)野生型病毒前C基因表達的產(chǎn)物可引起HLAA2限制性CTL發(fā)生反應(yīng)，而突變株病毒無此作用，說明特異性CTL對變異病毒的抗原喪失了反應(yīng)能力，從而導(dǎo)致宿主免疫功能低下。Tur等〔20〕也發(fā)現(xiàn)HBeAg的缺失易導(dǎo)致宿主免疫功能紊亂。慢性乙型肝炎病毒感染者前C區(qū)位點突變，常伴有較高水平HBVDNA復(fù)制效率，存在更嚴(yán)重的免疫紊亂，HBeAg的表達是影響宿主外周血T細(xì)胞亞群變化的一個重要因素。
4 總 結(jié)
HBV感染機體后，首先由APCs等吞噬細(xì)胞捕獲異己抗原，啟動天然免疫屏障，發(fā)揮非特異性的免疫應(yīng)答，起到初步清除病原體的目的。繼之通過一系列的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，把異己抗原信號呈遞給淋巴細(xì)胞，啟動適應(yīng)性免疫，活化的CTL通過兩條途徑清除病毒即胞溶途徑分泌穿孔素、顆粒酶等細(xì)胞毒分子直接殺傷病毒感染的靶細(xì)胞或者途徑介導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡和非胞溶途徑分泌細(xì)胞因子抑制病毒復(fù)制。而老年人胸腺老齡化退化，各種免疫細(xì)胞的活性明顯下降，機體免疫功能低下，免疫應(yīng)答能力下降，其抗原提呈功能及細(xì)胞免疫功能明顯下降，導(dǎo)致病毒感染的肝細(xì)胞持續(xù)發(fā)生損害，清除病毒抗原的作用明顯減弱，成為疾病的慢性化的主要因素。除上述因素外，老年人肝臟重量減輕，肝細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞器數(shù)明顯減少，也參與疾病慢性化的過程中。因此，對于老年HB的免疫學(xué)的研究，對其治療及預(yù)后有重要意義。
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小兒哮喘是一種表現(xiàn)反復(fù)發(fā)作性咳嗽，喘鳴和呼吸困難，并伴有氣道高反應(yīng)性的可逆性、梗阻性呼吸道疾病，會嚴(yán)重危害兒童的身體健康，異常免疫反應(yīng)在發(fā)病中起著重要作用，其主要病理過程為氣道黏膜水腫，嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞浸潤氣道，導(dǎo)致內(nèi)分泌物增多[1-2]。由于氣道有炎癥，使氣道高反應(yīng)性，細(xì)小支氣管管腔狹窄甚至閉塞，血清和氣道分泌物中總免疫球蛋白（IgE）和過敏原特異性IgE增高，該病理和病理生理改變的本質(zhì)是異常的免疫反應(yīng)。
1、遺傳學(xué)背景
哮喘為多基因遺傳?。浩溥z傳度高達77%，但環(huán)境因素僅占23%。通過結(jié)合DNA芯片技術(shù)與臨床表型關(guān)聯(lián)的分析得出：哮喘候選基因的篩選已被越來越多的人所關(guān)注。目前已發(fā)現(xiàn)11q與過敏體質(zhì)（atopy）有關(guān)，其控制總IgE和氣道高反應(yīng)性的基因位點位于染色體5q31成簇的細(xì)胞因子（IL-4，IL-13和IL-4受體）中。這些基因的突變導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)信息傳遞因子信息傳感和轉(zhuǎn)化活化劑-6（STAT6）活化[4]，促使atopy和哮喘的發(fā)生。而且β2受體的突變與哮喘有緊密的關(guān)系，位于14q的T細(xì)胞抗原受體（TCR）和特異性IgE反應(yīng)連鎖。由此可見，哮喘的發(fā)病和atopy的形成均具有遺傳背景.。然而近幾十年，哮喘的發(fā)病率卻在成倍的上升，這說明不僅僅是候選基因發(fā)生突變而導(dǎo)致的，主要原因是環(huán)境因素變化。此外，從已知的哮喘候選基因來看，均屬免疫因子的基因位點，這些基因多態(tài)性的表型（臨床表現(xiàn)）必然關(guān)系到免疫學(xué)改變[3]。
2、TH1/TH2 細(xì)胞功能失調(diào)
TH1 細(xì)胞的主要通過分泌IL-2和IFN- γ等細(xì)胞因子對抗細(xì)胞內(nèi)細(xì)菌及原蟲的免疫反應(yīng)，對誘發(fā)器官特異性自身免疫病、器官移植排斥反應(yīng)以及抗感染色疫中起面議調(diào)節(jié)作用，而TH2細(xì)胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13，能夠在誘發(fā)過敏反應(yīng)中調(diào)節(jié)體液免疫反應(yīng)，并輔助B細(xì)胞合成轉(zhuǎn)化免疫球蛋白，其中，分泌出的IL-4能夠促進IgE的合成，IL-5和IL-8能夠延長嗜酸性粒細(xì)胞在氣道內(nèi)的存活時間，所以，形成過敏體質(zhì)的基礎(chǔ)便是TH2的功能亢進[4]。
在一般情況下，TH1/ TH2細(xì)胞處于恒定狀態(tài)，二者功能發(fā)生變化時又會產(chǎn)生相互影響，例如當(dāng)哮喘患者TH1細(xì)胞功能下降時，TH2細(xì)胞的功能就反而增大，導(dǎo)致生成大量炎癥因子，IFN- γ水平降低，IL-4、IL-5水平升高，說明患者體內(nèi)TH1/ TH2功能失調(diào)，當(dāng)然，TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞的功能并不是相互獨立的，TH1/ TH2細(xì)胞起著相互抑制的作用，當(dāng)TH1內(nèi)的細(xì)胞因子IFN- γ拮抗TH2的IL-4和IL-10時，會導(dǎo)致TH2細(xì)胞的活性減弱，相反，當(dāng)TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-4和IL-10拮抗IL-2和IFN- γ時，TH1細(xì)胞的活性就會減弱?？偯庖咔虻鞍讜龠M肥大細(xì)胞和嗜酸粒形細(xì)胞分化，進而形成以IgE為特征的速發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，即遲發(fā)型哮喘反應(yīng)。
從最近的小兒哮喘發(fā)病機制的研究結(jié)果：諸多哮喘患兒的體內(nèi)并不存在TH1細(xì)胞功能低下或者TH2細(xì)胞功能亢進的現(xiàn)象，由此表明，TH1/ TH2細(xì)胞失衡并不是導(dǎo)致小兒哮喘發(fā)病的唯一因素，還尚有其他亟待可知的機制參與。
3、TH2細(xì)胞引起免疫反應(yīng)
1、嗜酸性粒細(xì)胞（eosinophil） 嗜酸性粒細(xì)胞屬于白細(xì)胞，其具有粗大的嗜酸性顆粒，內(nèi)含有過氧化物酶和酸性磷酸酶，氣道全層會在TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-5和 IL-13的誘導(dǎo)下聚集大量嗜酸性粒細(xì)胞，從而釋放出炎癥介質(zhì)，主要有嗜酸細(xì)胞神經(jīng)毒蛋白、膠原酶、NO、以及血小板激活因子等。
2、免疫球蛋白（IgE） IgE是人體的一種抗體，存在于血中，可以引起I型超敏反應(yīng)，TH2細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子IL-4能夠促成lgE的合成，它與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合釋放出炎性介質(zhì)，從而產(chǎn)生免疫功能。
3、細(xì)胞黏附分子（CAM） 細(xì)胞黏附分子能夠通過介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞及其他氣道結(jié)構(gòu)細(xì)胞的相互作用來調(diào)控白細(xì)胞在局部的聚集與歸巢等活動[2]，由于TH2內(nèi)細(xì)胞因子IL-6以及腫瘤壞死因子的刺激，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞大量在氣道聚集。同時，血管細(xì)胞黏附因子、細(xì)胞間黏附分子、分泌因子都會到氣道參與聚集。
4、趨化因子（chemokines） 趨化因子在炎癥反應(yīng)中有著不可替代的作用，它能夠吸引白細(xì)胞移行到感染部位的一些低分子量趨化因子（多為8-10KD），同樣，嗜酸細(xì)胞活化趨化因子也會參與到炎癥細(xì)胞在氣道聚集。
5、內(nèi)皮素（Ets） 內(nèi)皮素存在于血管內(nèi)皮以及各種組織和細(xì)胞中，是調(diào)節(jié)心血管功能的重要因子，能夠維持基礎(chǔ)血管張力與心血管系統(tǒng)穩(wěn)態(tài)。其合成主要取決于巨噬細(xì)胞原炎癥因子和腫瘤壞死因子-α的調(diào)控。內(nèi)皮素不僅能夠有效收縮支氣管平滑肌，而且還能促進黏膜下腺體的分泌以及促使平滑肌合成纖維細(xì)胞的增殖。
4、樹突狀細(xì)胞（DC）
樹突狀細(xì)胞是機體功能最強的專職抗原遞呈細(xì)胞，能高效地攝取、處理和遞呈抗原，自身有很強的免疫刺激能力，對小兒哮喘的發(fā)病機制起著至關(guān)重要的作用。其通常少量分布于與外部接觸的皮膚部位，DC主要分為髓樣DC（DCl）和淋巴樣DC（DC2），DCl分泌的IL-12和IL-18促使TH0細(xì)胞分化為TH1細(xì)胞，由于IL-4的刺激，TH0漸漸向TH2發(fā)育，同時IFN- γ的正反饋刺激DCl 使TH1分泌更多的IL-12，因而導(dǎo)致DCl功能不足，TH1/ TH2細(xì)胞功能失衡，很大程度上，會引起人的過敏反應(yīng)[5]。
DC有成熟狀態(tài)和未成熟狀態(tài)，在人體內(nèi)， DC大部分是非成熟狀態(tài)，未成熟DC有極強的抗原吞噬能力，在攝取抗原或受到外界因素刺激時就會分化為成熟DC，而成熟DC能有效激活初始型T細(xì)胞，近年來，人們越來越重視微環(huán)境因素對不成熟DC發(fā)育可能造成的影響，比如細(xì)胞因子。
最近研究表明又出現(xiàn)了低3種表型的DC[6]，即低分化DC，其吞噬功能很強，但分泌細(xì)胞因子的能力較弱，它與DC1、DC2不同的是，在提呈抗原的過程中并不會激活TH0細(xì)胞。由此看出，樹突狀細(xì)胞對小兒哮喘的發(fā)病具有關(guān)鍵作用。
5、免疫耐受現(xiàn)象
免疫耐受是指免疫活性細(xì)胞接觸抗原性物質(zhì)時所表現(xiàn)的一種特異性的無應(yīng)答狀態(tài)，如在抗原或過敏原刺激下，樹突狀細(xì)胞內(nèi)不成熟的DC能夠抑制氣道炎癥反應(yīng)。但準(zhǔn)確機制尚不明，導(dǎo)致不成熟DC誘導(dǎo)T細(xì)胞的無能化，可能是由于它們之間缺少共刺激分子。
6、哮喘的發(fā)作與因素
哮喘發(fā)作的前兆便是出現(xiàn)過敏體質(zhì)，與TH2細(xì)胞不同，T細(xì)胞主要產(chǎn)生IL-10來抑制TH1細(xì)胞和TH2細(xì)胞，而TH3細(xì)胞主要分泌TGF-β來抑制炎癥的反應(yīng)，通過誘導(dǎo)共刺激分子，T細(xì)胞、TH3細(xì)胞由于與其配體的相互連接而被活化 ，從而導(dǎo)致細(xì)胞功能缺乏，免疫耐受狀態(tài)被破壞，便出現(xiàn)了過敏體質(zhì)。
由于近年來哮喘發(fā)病率急速上升[7]，隨之便出現(xiàn)了各種導(dǎo)致因素，感染便是其中之一，感染的抗哮喘機制是極其復(fù)雜的，通過toll樣受體細(xì)菌會促使TH1的發(fā)育，由于缺乏經(jīng)常性呼吸道感染的原因，導(dǎo)致TH1不能完全發(fā)育，使新生兒時期，TH2細(xì)胞的功能亢進發(fā)展迅速，便形成了過敏體質(zhì)。已有醫(yī)學(xué)證明鼻病毒、腺病毒、衣原體或支原體呼吸道感染也會導(dǎo)致哮喘的發(fā)作，但是也并不是所有的呼吸道感染都能誘發(fā)哮喘的發(fā)作。是否導(dǎo)致哮喘的發(fā)作取決于病原體的抗原成分，成分不同，可能誘發(fā)哮喘也可能抗哮喘，哮喘的發(fā)作與感染機會并沒有直接的關(guān)系。
7、哮喘的免疫學(xué)治療
隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷更新，目前已研究出許多控制哮喘發(fā)作的方法，如氣道吸入糖皮質(zhì)激素、抗原特異性免疫療法以及LgE單克隆抗體治療等療法，但這些并不能從根本上治療哮喘，，如糖皮質(zhì)激素，它只能控制哮喘癥狀，必須持續(xù)用藥來預(yù)防復(fù)發(fā)。所以深入研哮喘發(fā)病機制探索出一種新的能夠抑制哮喘的發(fā)作的療法是有意義的。
由于哮喘發(fā)作的機制是免疫耐受被打破，所以想要研究出預(yù)防和治療哮喘的有效方法就需重建免疫耐受，增強免疫耐受的方法如下：
7.1益生態(tài)學(xué)治療：為激活黏膜免疫系統(tǒng)NOD2的活性來預(yù)防過敏性疾病的發(fā)生，可口服乳酸桿菌。
7.2抗原特異性免疫治療：通過反復(fù)接觸少量過敏原來調(diào)節(jié)機體的免疫應(yīng)答，使機體產(chǎn)生耐受性，當(dāng)機體再次接觸過敏原時，便可減少介質(zhì)釋放，減輕氣道炎癥，從而降低氣道反應(yīng)性。
7.3脫敏治療：脫敏治療有口服過敏原和皮下注射過敏原，為提高其特異性免疫耐受，可通過誘導(dǎo)IL-10來抑制IL-4的產(chǎn)生。皮下注射過敏原已廣泛應(yīng)用于小兒哮喘的臨床。
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【關(guān)鍵詞】 中西醫(yī)結(jié)合 抗腫瘤 免疫學(xué)
在眾多的對腫瘤治療方法的探索中，各種治療方式的結(jié)果大多不如預(yù)期有效［1］，而傳統(tǒng)的化療藥具有明顯的毒副作用及耐藥性，從天然產(chǎn)物中提取可以用于臨床的有效成分激發(fā)機體免疫系統(tǒng)的活性一直是多年來學(xué)術(shù)界感興趣的重要研究課題。我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)不但具有獨特的優(yōu)勢，而且與西醫(yī)相比，中醫(yī)更重視整體認(rèn)識疾病發(fā)生的條件，強調(diào)“治未病”。中醫(yī)認(rèn)識到正虛是疾病的重要內(nèi)因，即所謂“邪之所湊，其氣必虛”。正虛學(xué)說已被現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識和承認(rèn)。西醫(yī)比較能融合現(xiàn)代科學(xué)成就，認(rèn)識病癥具體、深入。越來越多的意向認(rèn)為中西醫(yī)應(yīng)當(dāng)互相補充，但如何互相補充又是擺在人們面前的一個迫切需要解決的難題。我們認(rèn)為，這種結(jié)合或補充，不但在于臨床實踐中的摸索，而且還應(yīng)同時解決理論上的問題，只有這樣才能被國際醫(yī)學(xué)界認(rèn)可?，F(xiàn)將中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤的免疫學(xué)機制研究綜述如下。
1 對非特異性免疫抗腫瘤的影響
機體免疫機能狀態(tài)的異常及腫瘤免疫逃逸是腫瘤發(fā)生的重要原因，同時腫瘤細(xì)胞及其產(chǎn)生的腫瘤性免疫抑制因子往往導(dǎo)致荷瘤機體免疫機能低下，由于腫瘤細(xì)胞抗原性較弱或抗原調(diào)變等因素導(dǎo)致腫瘤特異性免疫往往難以奏效，因此非特異性免疫在機體抗腫瘤免疫方面發(fā)揮著重要作用。機體的非特異性免疫包括單核巨噬細(xì)胞及NK細(xì)胞所構(gòu)成的機體腫瘤免疫監(jiān)視中的第一道防線。
1.1 中西醫(yī)聯(lián)合對巨噬細(xì)胞抗腫瘤的影響欖香烯是從姜科植物溫郁金中提取的抗癌有效成分。將其用專利方法制備出Hca-F欖香烯復(fù)合瘤苗HSP70（HSP70HTCV），分析其對小鼠腹腔或脾臟巨噬細(xì)胞功能的影響及抗免疫作用的機制，發(fā)現(xiàn)HSP70HTCV免疫小鼠脾臟巨噬細(xì)胞分泌TNF的能力高于HSP70BCG免疫小鼠的脾臟巨噬細(xì)胞，且巨噬細(xì)胞吞噬中性紅的能力亦明顯增強，由此得出結(jié)論［2］，HSP70HTCV免疫誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞有更強的殺傷活性。
1.2 中西醫(yī)聯(lián)合對NK細(xì)胞抗腫瘤的影響艾迪注射液聯(lián)合化療藥物環(huán)磷酰胺、長春新堿、阿霉素等對惡性淋巴瘤進行的臨床治療研究中，兩個療程后，治療組NK細(xì)胞活性明顯高于對照組，能夠提高化療的耐受性，治療后KPS有明顯地提高，對肝腎功能、骨髓功能無明顯影響［3］。艾迪注射液是由人參、黃芪、刺五加、斑蝥等組成，主要含有人參皂苷、黃芪皂苷、黃芪多糖、刺五加多糖及去甲斑蝥素。研究者認(rèn)為此藥可作為臨床抗腫瘤治療的輔助藥物。那么，分析其藥物成分，再結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究，國內(nèi)外學(xué)者對人參、黃芪、刺五加免疫學(xué)機制抗腫瘤作用的研究中均得到肯定的結(jié)果［4~9］，如研究顯示人參皂苷Rg1和Rh1均可不同程度地增強正常人外周血DC刺激T細(xì)胞的增殖及LPAK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的殺傷能力，推測Rg1和Rh1可能促進DC合成分泌IL-2和IL-12并提高DC表面共刺激分子的表達，從而增強DC的抗原遞呈能力［6］；而斑蝥有抑制腫瘤生長的作用，經(jīng)去甲基處理的斑蝥素在保持其原有療效的同時，可促進骨髓造血干細(xì)胞向粒－單核細(xì)胞分化而使白細(xì)胞增加［10］。當(dāng)然，中藥復(fù)方制劑的分析是不能僅以每一成分的作用進行簡單的疊加的。另外，艾迪注射液抗瘤作用的免疫學(xué)機理也是多方面的［11］，同時諸如艾迪注射液與化療藥物聯(lián)合這樣通過增強NK細(xì)胞活性發(fā)揮抗癌作用的藥物也還有香菇多糖［12］、益肺顆粒［13］等。
2 對特異性免疫抗腫瘤的影響
機體對腫瘤的免疫應(yīng)答包括細(xì)胞和體液免疫，兩者相互協(xié)作共同殺傷腫瘤細(xì)胞，但以細(xì)胞免疫為主。
2.1 對細(xì)胞免疫的影響參與抗腫瘤細(xì)胞免疫應(yīng)答的主要有T細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞以及前文中所提及的對特異性細(xì)胞免疫起重要調(diào)節(jié)作用的NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等。
2.1.1 對T細(xì)胞的作用
αβT細(xì)胞：αβT細(xì)胞包括MHC I類分子限制的CD8+CTL細(xì)胞和MHC Ⅱ類分子限制的CD4+輔T細(xì)胞，兩者活化都需要雙信號刺激。第一信號是抗原刺激信號，指從腫瘤細(xì)胞脫落下的腫瘤抗原，經(jīng)APC攝取，加工成抗原多肽，并與細(xì)胞表面MHC Ⅱ類分子結(jié)合遞呈給CD4+ TH細(xì)胞。在腫瘤細(xì)胞合成的腫瘤肽，與MHC I類分子結(jié)合后共同表達于細(xì)胞表面，而被CD8+ CTL細(xì)胞識別。黃芪注射液聯(lián)合MHC I類限制性腫瘤抗原多肽Mut1致敏的樹突狀細(xì)胞（DC）對肺癌小鼠的治療作用及免疫學(xué)原理的研究中，發(fā)現(xiàn)以腫瘤抗原多肽致敏的DC與黃芪注射液聯(lián)合治療能更有效的促進荷瘤宿主的免疫應(yīng)答，具有顯著的體內(nèi)抑制肺癌轉(zhuǎn)移的效果［14］。再說第二類信號，即協(xié)同刺激信號，T細(xì)胞除通過TCR與Ag-MHC分子復(fù)合體接受抗原信號外，還要通過APC或腫瘤細(xì)胞表面協(xié)同刺激信號，才能使T細(xì)胞有效地活化?；罨腃D4+T細(xì)胞可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，促進CD8+T細(xì)胞活化，激活巨噬細(xì)胞，參與抗腫瘤作用。放化療法配合艾灸神闕穴治療晚期鼻咽癌就有一定的抗腫瘤和抗放化療損傷作用［15］，還有如百合固金湯口服聯(lián)合利君派舒靜脈滴注治療肺癌［16］，治療組 IL-2，CD3， CD4， CD4/CD8均明顯上升，與治療前比較，差異有非常顯著性意義 (P＜ 0.01)。
γδT細(xì)胞：γδT細(xì)胞分化發(fā)展早于αβT細(xì)胞，多分布在全身各處上皮組織內(nèi)，所發(fā)揮的細(xì)胞毒作用可能不受經(jīng)典MHC分子限制，且能殺傷對NK細(xì)胞不敏感的靶細(xì)胞，因此γδT細(xì)胞與NK細(xì)胞同樣被認(rèn)為是抗腫瘤免疫監(jiān)視功能的第一道防線。已有研究發(fā)現(xiàn)此類細(xì)胞能在體外殺傷骨髓瘤和淋巴瘤的細(xì)胞系［17］等。循環(huán)的Vγ9Vδ2 T細(xì)胞可選擇性的表達自然殺傷細(xì)胞受體蛋白1A（NKRP1A），NKRPIA 分子的表達受IL-12水平的調(diào)控，效應(yīng)性T細(xì)胞在殺傷腫瘤時可以釋放IL-12，如此可吸引更多的NKRPIA+的γδT細(xì)胞浸潤腫瘤組織。肺瘤平膏即可上調(diào)DC與抗原遞呈功能相關(guān)膜分子MHC-Ⅱ，CD80，CD83，CD86及CD40的表達，并促進DC分泌IL-12水平，提高機體的抗腫瘤免疫監(jiān)視功能［18］。那么，IL-12水平上升后是否對γδT細(xì)胞產(chǎn)生影響，作者并未做出進一步實驗加以證實，同時也未見其他相關(guān)報道。
2.1.2 對樹突狀細(xì)胞的作用樹突狀細(xì)胞具有很強的遞呈抗原的能力，能顯著刺激T細(xì)胞的活化增殖，起抗腫瘤作用。現(xiàn)代研究認(rèn)為人體免疫功能狀態(tài)即中醫(yī)所指的“正氣”，當(dāng)機體的免疫功能低下，尤其是細(xì)胞免疫功能低下時，免疫監(jiān)視機能下降，DC功能低下，正氣虧虛，機體易患腫瘤。“久病入絡(luò)”“久痛入絡(luò)”，表明“絡(luò)”既是組織細(xì)胞實現(xiàn)功能協(xié)調(diào)的物質(zhì)載體，又是疾病在體內(nèi)傳變的中心環(huán)節(jié)［19］。因而應(yīng)用中藥扶正培本，通絡(luò)解毒，通過干預(yù)和調(diào)節(jié)腫瘤患者DC 的抗原遞呈功能，可能是今后中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的重要切入點之一［20］。這是在中醫(yī)理論框架內(nèi)，把中醫(yī)扶正培本治則即提高機體抗邪機能的機制與DC抗原遞呈功能有機地結(jié)合，應(yīng)用扶正培本為主的中藥或復(fù)方制劑，作為外源免疫調(diào)節(jié)劑，通過多途徑干預(yù)和調(diào)節(jié)患者DC表面分子的表達，調(diào)節(jié)其抗原遞呈功能，提高患者抗腫瘤機能，抑制腫瘤形成、增殖、侵襲與轉(zhuǎn)移。這不但在中西醫(yī)結(jié)合理論上進行了闡明，而且又研究了其實際應(yīng)用價值，可謂中西醫(yī)結(jié)合解決抗腫瘤問題的典范。
2.2 對體液免疫的影響腫瘤抗原刺激所產(chǎn)生的抗體是通過免疫監(jiān)視而產(chǎn)生保護性作用的，能被抗體所識別的腫瘤抗原可能是T細(xì)胞活化劑［21］。在用瓊脂擴散法測定36例放療加艾灸和30例單純放療病人治療前后的IgG，IgA，IgM后，發(fā)現(xiàn)艾灸組免疫球蛋白明顯高于單純放療組，尤其IgG有非常顯著的意義［22］。針刺曲池、合谷、足三里等穴，對惡性腫瘤放化療患者血清IgG，IgA，IgM含量具有雙向調(diào)節(jié)作用［23］。在腫瘤患者體內(nèi)存在早期階段就出現(xiàn)的針對腫瘤抗原而產(chǎn)生的免疫應(yīng)答［24］，抗腫瘤抗原的抗體出現(xiàn)常與正常體細(xì)胞的交叉反應(yīng)，引起了許多腫瘤病人的瘤外綜合征［25］。平消膠囊主要成分為郁金、馬錢子粉、仙鶴草、五靈脂、白礬、火硝、干漆(制)、枳殼(熬炒)等藥物，與放療聯(lián)合后能明顯降低血清VCA-IgA，EA-IgA抗體水平，改善生活質(zhì)量，提高近期和遠(yuǎn)期療效［陳緒元，代曉波，張 菊，等. 平消膠囊與放療聯(lián)合治療對鼻咽癌血清VCA-IgA， EA-IgA影響研究.平消膠囊治療腫瘤論文匯編(西安正大有限公司編)，2003：122］。這些機制體現(xiàn)了中西醫(yī)結(jié)合治療惡性腫瘤從體液免疫水平分析，不但發(fā)揮了“免疫激發(fā)劑”的作用，而且還發(fā)揮了“免疫抑制劑”的作用，從多方面調(diào)節(jié)機體的免疫水平，正符合中醫(yī)辨證治療，以扶正培本為主的特色及優(yōu)勢。
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3 結(jié)語
中西醫(yī)結(jié)合一直是一個有爭議的話題，因為它們具有兩個不同的理論體系。目前中西醫(yī)結(jié)合存在的問題是：①還沒有真正在發(fā)病機理及治療機理方面將中西醫(yī)的理論真正揉合起來或?qū)?yīng)起來；②對抗腫瘤藥物的篩選多為將對腫瘤治療有一定作用的中醫(yī)藥與放化療或其它現(xiàn)行西醫(yī)療法及藥物合用，觀察效果，較為膚淺、生硬，沒有從機制上加以闡明；③中醫(yī)“辨證施治”“異病同治，同病異治”的理論優(yōu)勢沒有體現(xiàn)出來，大多為將一種中藥與某種西醫(yī)療法連續(xù)應(yīng)用，沒有隨機體免疫狀況或腫瘤發(fā)展?fàn)顩r的變化而調(diào)整治療方案；④結(jié)合中，中醫(yī)藥大多為輔助治療，幾乎沒有調(diào)整的價值；⑤對于中晚期患者的治療遠(yuǎn)期生存率不高；⑥沒有對中西藥各成分之間的作用進行研究。
當(dāng)然，在近幾十年中西醫(yī)結(jié)合方面也取得了很多成績，如扶正類中藥在對放化療耐藥性及副作用治療方面有優(yōu)勢，中醫(yī)藥在輔助西醫(yī)治療中取得了很大進展。另外，中醫(yī)藥在腫瘤預(yù)防及康復(fù)領(lǐng)域具有令世人矚目的成就，并且從中西醫(yī)結(jié)合角度得到了國際醫(yī)學(xué)界的認(rèn)可。相信，通過加強國內(nèi)外合作研究，與最新研究成果結(jié)合（如計算機模擬等），通過強調(diào)高效、實用、綜合，中西醫(yī)結(jié)合會得到全面發(fā)展，中西醫(yī)結(jié)合抗腫瘤研究會取得突破性的進展。
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中圖分類號：G640 文獻標(biāo)識碼：A DOI：10.16400/ki.kjdks.2015.06.019
Research Progress on the Professional
Thought of Free Medical Students
WANG Jingya[1][2]， LI Xiaobo[3]， YUAN Zhaokang[1]
（[1]School of Public Health， Nanchang University， Nanchang Jiangxi 330031;
[2]First Clinical Medical College， Gannan Medical University， Ganzhou Jiangxi 341000 ;
[3]College of Basic Medical Science， Gannan Medical University， Ganzhou Jiangxi 341000）
Abstract Medical personnel education reform is an important guarantee of the sustainable development of grass-roots health cause， and it is also one of the constraints the development of public health in the world of today. The paper studies on the training policy and free medical students' professional views on free medical students has combed， which lays a foundation for further study of free medical education model， provide a reference for the free medical postgraduate professional thought.
Key words free medical students; orientation training; medical education; professional thought
2010年6月，國家發(fā)改委、衛(wèi)生部、教育部、財政部、人力資源和社會保障部聯(lián)合下發(fā)《關(guān)于開展農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生免費培養(yǎng)工作的實施意見》（發(fā)改委[2010]1198號）和教育部《關(guān)于做好訂單定向醫(yī)學(xué)生免費培養(yǎng)和招生工作的通知》。意見規(guī)定，“從2010年起，我國連續(xù)三年在高等醫(yī)學(xué)院校開展免費醫(yī)學(xué)生培養(yǎng)工作，重點為鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院及以下的醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)培養(yǎng)從事全科醫(yī)療的衛(wèi)生人才?！倍ㄏ蛏c地方衛(wèi)生行政機構(gòu)簽訂“定向協(xié)議書”，對免費醫(yī)學(xué)生的相關(guān)身份做了詳細(xì)的說明，對雙方的權(quán)利義務(wù)，以及相關(guān)管理工作進行了說明。
1 相關(guān)概念的研究
免費醫(yī)學(xué)生的培養(yǎng)政策，既有利于為基層醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)培養(yǎng)和輸送急需和緊缺的人才，為基層百姓解決“缺醫(yī)少藥”、“看病難”的問題，同時也解決了廣大農(nóng)村考生“上學(xué)難”、“就業(yè)難”的問題，實現(xiàn)了雙贏的社會效益。
專業(yè)思想是指學(xué)生對該門學(xué)科的理性認(rèn)識，是一種從信念、情感到行為的穩(wěn)定的綜合心理品質(zhì)，它包括學(xué)生對所學(xué)專業(yè)及對今后所從事的與專業(yè)相關(guān)的職業(yè)所持的觀點和態(tài)度。①
免費醫(yī)學(xué)生專業(yè)思想是指免費醫(yī)學(xué)生對所學(xué)專業(yè)以及國家免費培養(yǎng)，畢業(yè)后定向到基層醫(yī)療衛(wèi)生單位工作這一政策理性認(rèn)識的觀點和態(tài)度，是報考動機、學(xué)習(xí)狀況、專業(yè)認(rèn)識、職業(yè)認(rèn)同、職業(yè)發(fā)展等方面的綜合評價。
2 免費醫(yī)學(xué)生培養(yǎng)政策及意義的研究
江西省從2010年開始在全省8所醫(yī)學(xué)院校中招收免費醫(yī)學(xué)生，培養(yǎng)工作持續(xù)三年來取得了一定的成效，得到了社會各界的廣泛關(guān)注。但是在政策指導(dǎo)下培養(yǎng)出來的免費醫(yī)學(xué)生是否符合政策的期望值，定向生的專業(yè)思想是否穩(wěn)定，值得開展相關(guān)研究。
（1）對豐富和完善免費醫(yī)學(xué)生人才培養(yǎng)模式具有的重要的理論和實踐價值。（2）有利于深入地了解免費醫(yī)學(xué)生的專業(yè)思想現(xiàn)況、職業(yè)認(rèn)同感、職業(yè)發(fā)展方向，評價其是否達到國家政策的要求和目標(biāo)。（3）對貫徹落實國家《關(guān)于開展農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)生免費培養(yǎng)工作的實施意見》和《以全科醫(yī)生為重點的基層醫(yī)療衛(wèi)生隊伍建設(shè)規(guī)劃》，促進基層衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展具有戰(zhàn)略意義。
目前，全球普遍存在衛(wèi)生人力不足的問題，許多國家存在衛(wèi)生人力資源分布不均衡的現(xiàn)象，盡管如此，各個國家在針對改善農(nóng)村衛(wèi)生人員人力不足等問題上出臺了許多相關(guān)政策，來緩解農(nóng)村衛(wèi)生人員不足的壓力，并配套了相關(guān)補償政策。美國、澳大利亞、德國、日本等國家都有成熟且成功的經(jīng)驗。
1970年建立了國家衛(wèi)生服務(wù)合作項目以及Medicare激勵支付項目，而且美國還舉辦了農(nóng)村定向型醫(yī)學(xué)院，建立了農(nóng)村醫(yī)學(xué)教育系列，保障農(nóng)村衛(wèi)生人力的供給。澳大利亞為引導(dǎo)農(nóng)村的學(xué)生報考醫(yī)學(xué)院，在招生宣傳工作方面，醫(yī)學(xué)院校開展了許多專題宣傳節(jié)目以吸引考生報考，同時對農(nóng)村衛(wèi)生工作人員采取了一系列的激勵政策吸引人才留在農(nóng)村工作。為了幫助偏遠(yuǎn)社區(qū)吸引和留住全科醫(yī)生，政府規(guī)定全科醫(yī)生在這些社區(qū)服務(wù)3年時間，有資格獲得每年5萬元的補助。澳大利亞的這些吸引衛(wèi)生人才留在農(nóng)村工作的政策對我郭的“免費醫(yī)學(xué)生”的培養(yǎng)政策的制定有一定借鑒和參考價值。同時，據(jù)澳大利亞農(nóng)村大學(xué)生籌劃指導(dǎo)委員會報告，國家已把醫(yī)學(xué)院是否實施面向農(nóng)村的課程同教育經(jīng)費分配聯(lián)系起來，并且澳大利亞聯(lián)邦政府為農(nóng)村全科醫(yī)師獎勵計劃提供資助，以便開發(fā)醫(yī)學(xué)院一級的農(nóng)村醫(yī)學(xué)課程。②日本產(chǎn)業(yè)醫(yī)科大學(xué)則在1984到2013年期間通過資助的方式，培養(yǎng)產(chǎn)業(yè)醫(yī)師2875名，這些醫(yī)師大部分到企業(yè)工作，按照培養(yǎng)規(guī)定義務(wù)工作九年。③
3 免費醫(yī)學(xué)生專業(yè)思想的相關(guān)研究
在借鑒發(fā)達國家農(nóng)村人才培養(yǎng)模式的基礎(chǔ)上，我國的免費醫(yī)學(xué)生的研究也逐漸成熟起來，主要是集中在已經(jīng)招收免費醫(yī)學(xué)生的高校開展，包括人才培養(yǎng)模式、政策研究、教育教學(xué)、職業(yè)生涯規(guī)劃、人文素養(yǎng)培養(yǎng)等方面。
3.1 現(xiàn)況分析、學(xué)業(yè)狀況、報考動機、專業(yè)認(rèn)知方面
范文燕（2014）、馮秋季（2013）、鐘繼潤（2012）、劉振優(yōu)（2012）等學(xué)者通過問卷調(diào)查和深度訪談，發(fā)現(xiàn)學(xué)生的報考定向生的動機是多種因素的綜合考慮，大部分的學(xué)生選擇免費醫(yī)學(xué)定向培養(yǎng)是因為家庭困難及定向生能夠免學(xué)費及住宿費、包分配工作，學(xué)生普遍了解定向政策，但不是十分愿意到農(nóng)村工作，其原因主要是認(rèn)為“發(fā)展空間太小”;也有學(xué)生怕“工資低”，提出應(yīng)該提高學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性，加強社區(qū)實踐教育，同時政府還要給在農(nóng)村工作的醫(yī)科大學(xué)生提供各種培訓(xùn)、交流、實踐、學(xué)習(xí)的機會，創(chuàng)造各種平臺，使他們的技能提升動態(tài)化、常態(tài)化，從而拓展學(xué)生的發(fā)展空間。④⑤⑥⑦⑧
3.2 免費醫(yī)學(xué)生職業(yè)生涯規(guī)劃方面
許多學(xué)者在免費醫(yī)學(xué)生的職業(yè)生涯規(guī)劃方面的研究比較成熟，普遍認(rèn)為免費醫(yī)學(xué)生的職業(yè)規(guī)劃不是很明確，就業(yè)能力不強，職業(yè)認(rèn)同感不強，職業(yè)準(zhǔn)備缺乏，應(yīng)該加強誠信教育，積極引導(dǎo)和教育，增強學(xué)生對未來職業(yè)的認(rèn)識和認(rèn)可。⑨
3.3 免費醫(yī)學(xué)生人文素養(yǎng)方面
其一，思想政治教育方面。許多學(xué)者有這方面的研究，普遍認(rèn)為應(yīng)為積極發(fā)揮輔導(dǎo)員在免費醫(yī)學(xué)生思想政治教育中的作用，突出理想信念教育和感恩教育，加大“國家在免費醫(yī)學(xué)生培養(yǎng)政策”方面的宣傳力度，加強醫(yī)德教育，促進學(xué)生職業(yè)認(rèn)同感的形成，創(chuàng)新性地利用成長導(dǎo)師制加強學(xué)生的思想政治教育。⑩
其二，人文素養(yǎng)方面。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為免費醫(yī)學(xué)生的感恩意識培養(yǎng)、信用行為培養(yǎng)、幸福觀培養(yǎng)等方面的教育十分重要。與當(dāng)?shù)匦l(wèi)生部門、用人單位簽訂協(xié)議后，能夠認(rèn)識到國家政策的扶持，是否能履行協(xié)議畢業(yè)后回到基層工作，以及工作一段時間以后會不會有幸福感，這些問題都是免費醫(yī)學(xué)生人文素質(zhì)的體現(xiàn)，也是在校期間要加強教育的方面。
綜上所述，國內(nèi)學(xué)者在免費醫(yī)學(xué)生專業(yè)思想、學(xué)習(xí)現(xiàn)狀、職業(yè)生涯規(guī)劃、職業(yè)認(rèn)同等方面做了許多研究，但是定位在江西省范圍內(nèi)，結(jié)合江西省免費醫(yī)學(xué)生實際，研究其專業(yè)思想現(xiàn)狀、職業(yè)認(rèn)同感、職業(yè)生涯規(guī)劃是否符合免費醫(yī)學(xué)生的培養(yǎng)政策，是否能夠真正在畢業(yè)后安心留在農(nóng)村工作，這些問題值得進一步的研究和探討。
*通訊作者：袁兆康
項目基金：贛南醫(yī)學(xué)院2014年度校級人文社會科學(xué)培育課題，項目編號：RP201409
注釋
① 付宏.武漢體育學(xué)院體育教育學(xué)生專業(yè)思想現(xiàn)狀之研究[D].武漢體育學(xué)院，2006.
② 趙楠，賈紅英，陳迎春，左伶俐，楊帆.國外農(nóng)村衛(wèi)生人力策略比較及對我國的啟示[J].中國初級衛(wèi)生保健，2008.2：20-21.
③ Isse T，Nakamura H， Hachisuka K. University of Occupational and Environmental Health， Japan： 2013 alumni physician statistics[J]. Journal of UOEH， 2013，35 Suppl：47-52.
④ 范文燕，汪鑫，車向新，楊耀防，王偉業(yè).農(nóng)村定向免費醫(yī)學(xué)生專業(yè)認(rèn)知現(xiàn)狀及其影響因素的實證研究[J].中國衛(wèi)生事業(yè)管理，2014.1：45-47.
⑤ 范文燕，汪鑫，車向新，王偉業(yè).基于職業(yè)認(rèn)同的農(nóng)村訂單定向醫(yī)學(xué)人才培養(yǎng)模式探索[J].中國衛(wèi)生事業(yè)管理，2014.3：212-214.
⑥ 馮秋季.河南省定單定向醫(yī)學(xué)生農(nóng)村就業(yè)意愿調(diào)查[J].中國衛(wèi)生事業(yè)管理，2013.5：394-396.
⑦ 鐘繼潤，俞軼鈞，王培芳.基于多級估量法的免費醫(yī)學(xué)生報考動機分析――以贛南醫(yī)學(xué)院為例[J].贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012.5：667-669.
⑧ 劉振優(yōu).訂單定向本科臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生狀況分析[J].重慶醫(yī)學(xué)，2012.16：1668-1670.
免疫分析的發(fā)展伴隨著抗體制備技術(shù)的改進而不斷提高。美國科學(xué)家Yalow等人首先將標(biāo)記技術(shù)引入免疫分析，他們首先用放射免疫分析法(RIA)進行測定胰島素。由于這種試驗方法限制了試劑的壽命，難以獲得長期穩(wěn)定的檢測標(biāo)準(zhǔn)，同時由于存在同位素的使用，不僅會損害操作人員身體健康，也會帶來污物處理困難的問題。為了找到更為合理的免疫分析法成為以后20年來研究的熱點。直到70年代末，國外有學(xué)者將免疫反應(yīng)與化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)相結(jié)合，這種集高靈敏度和高特異性的技術(shù)稱之為化學(xué)發(fā)光免疫分析法，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)優(yōu)勢比較明顯，主要有以下幾點：第一，靈敏度高，檢測限范圍更精準(zhǔn);第二，自動化程度高，并且沒有放射性輻射危害;第三，發(fā)光標(biāo)記物穩(wěn)定，有效期長，同時應(yīng)用范圍寬，對于分子大小不同的抗原、半抗原及抗體都可檢測。因此，化學(xué)發(fā)光免疫分析在臨床、衛(wèi)生、食品、環(huán)保和軍事等領(lǐng)域正被越來越多地用于激素、蛋白質(zhì)、腫瘤、毒物、病毒等成分檢測。
2 免疫分析基本原理
由免疫反應(yīng)系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)兩個關(guān)鍵部分組成了化學(xué)發(fā)光免疫分析的基本原理，化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)主要氧化以及催化的作用于化學(xué)發(fā)光物質(zhì)，產(chǎn)生一個激發(fā)態(tài)的中間體，在處于穩(wěn)定狀態(tài)時，發(fā)射出光子，然后通過測量儀器測量光量子。通過標(biāo)記物與發(fā)光強度的關(guān)系，進而測出被測物質(zhì)含量。而免疫反應(yīng)系統(tǒng)是將發(fā)光物質(zhì)在抗原或抗體上直接標(biāo)記。
3 化學(xué)免疫分析分類
化學(xué)發(fā)光免疫分析法主要以標(biāo)記法的不同來進行分類，目前習(xí)慣上將免疫分析法主要分為兩類，第一主要是標(biāo)記免疫分析法，其次是酶免疫分析法，前者是以化學(xué)發(fā)光標(biāo)記，后者是以酶標(biāo)記，以化學(xué)發(fā)光底物作為信號試劑來進行發(fā)光，其原理是不相同的。除此之外，包括熒光免疫分析法以及電化學(xué)發(fā)光免疫分析法也是目前存在的化學(xué)免疫法分析方法。
3.1 化學(xué)發(fā)光標(biāo)記免疫分析
將化學(xué)發(fā)光劑如吖啶酯類化合物，直接標(biāo)記在抗原上或抗體上，其基本原理是啟動發(fā)光劑發(fā)光，快速閃爍。這種標(biāo)記物其化學(xué)反應(yīng)簡單、快速、無須催化劑;夾心法用于大分子抗原，競爭法主要用于檢測小分子抗原，另外本底低，非特異性結(jié)合相對較少光量不會因為分子大小而受影響，因此能增加靈敏度，一般常用的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)主要是通過啟動發(fā)光試劑NaOH-H2O2作用而發(fā)光，其發(fā)光非常迅速，小分子物質(zhì)多采用競爭法，夾心法主要用于大分子物質(zhì)。
3.2 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析
通過酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)，再作用于發(fā)光底物，在信號劑的作用下發(fā)光，然后用發(fā)光測定儀進行測定?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，按照標(biāo)記免疫分析，應(yīng)屬酶免疫分析，其操作步驟與酶免分析完全相同。目前常用的標(biāo)記酶為堿性磷酸酶和辣根過氧化物酶，它們有各自的發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光酶免疫分析法種類大致有三種，首先是HRP標(biāo)記CLEIA，一般常用3-氨基鄰苯二甲酰肼作為底物，也即是魯米諾或者用其衍生物4-氨基鄰苯二甲酰肼也是可以的，這兩種都是重要的發(fā)光試劑。需要注意的是該底物需要在堿性緩沖溶液中進行氧化反應(yīng)，生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)然這需要在過氧化物酶及活性氧存在的條件下進行，中間體回到基態(tài)時就可以發(fā)光，此時的波長一般在425nm。曾經(jīng)先前有人用該標(biāo)記底物標(biāo)記抗原或抗體，但后來發(fā)現(xiàn)其發(fā)光強度多受靈敏度的影響。目前用過氧化物酶進行標(biāo)記，其發(fā)光強度主要依賴酶免疫反應(yīng)中的酶的濃度大小;其次增強發(fā)光酶免疫分析也是化學(xué)發(fā)光酶免疫分析的一種，它主要是在將增強的發(fā)光劑加入到發(fā)光系統(tǒng)中，加強發(fā)光的信號強度，并且能夠保持長時間的穩(wěn)定性，在一定程度上提高了該分析方法的準(zhǔn)確性和靈敏度，便于多次測定。目前在一些現(xiàn)代化的設(shè)備上，還可以由計算機進行精確控制操作，比如，往系統(tǒng)中加入發(fā)光試劑以及混合、溫育、洗滌等，甚至后期的數(shù)據(jù)處理，進而繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，最終完成患者血清樣品的分析并打印出結(jié)果;最后一種就是用ALP標(biāo)記的CLEIA，這種分析方法一般多用環(huán)-1，22-二氧乙烷衍生物作為發(fā)光底物，它的發(fā)光原理主要是其用化學(xué)發(fā)光酶免疫分析底物而設(shè)計的分子結(jié)構(gòu)穩(wěn)固，其中的芳香基作為發(fā)光基團和酶作用，在發(fā)光試劑的作用下發(fā)光，該底物在堿性磷酸酶的作用下，磷酸酯基發(fā)生水解而脫去一個磷酸基，就會產(chǎn)生一個穩(wěn)定的中間體，然后中間體發(fā)生裂解會產(chǎn)生金剛烷酮和激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，這種常見底物是AMPPD，其作為磷酸酯酶的直接化學(xué)發(fā)光底物，多用來檢測堿性磷酸酯酶和一些配基的結(jié)合物。
4 應(yīng)用
4.1 激素、蛋白質(zhì)和腫瘤檢測
該系統(tǒng)使反應(yīng)物形成均相混懸液，順磁微粒作為固定相，增大反應(yīng)面積，加速免疫反應(yīng)，快速分離，自動洗滌，減少酶和催化劑的使用，pH調(diào)整即可，避免了許多影響因素，廣泛應(yīng)用于甲狀腺功能、藥物檢測、腫瘤標(biāo)志物及心血管等項目。
4.2 病毒、毒物檢測
楊秀岑等用ABEI標(biāo)記兔抗大腸桿菌lgG，試樣溫育、離心、沉淀峰值用luminol-H2O2-NaOH 發(fā)光體系測定;章竹君等測定了糞樣中的輪狀病毒以HRP酶標(biāo)記;為研究TNT對人體的毒害作用提供方法，張麗民等以HRP標(biāo)記免疫測定了血清中4-氨基-2，6-二硝基甲苯，效果非常顯著。
4.3 其他方面的應(yīng)用
【關(guān)鍵詞】
人文教育；促進；大學(xué)生；全面發(fā)展；研究
0 引言
近年來，高職院校中不同程度存在著重專業(yè)、輕素質(zhì)，重教育、輕德育的現(xiàn)象，過分重視專業(yè)技能和職業(yè)能力的培養(yǎng)，從而導(dǎo)致忽視學(xué)生全面素質(zhì)的提高。形成部分學(xué)生辨別是非能力差，思想認(rèn)識水平低；心理脆弱，公德意識低下。當(dāng)學(xué)生走出校門后，獨立生活能力差，社會適應(yīng)能力低，處理人際關(guān)系能力差，缺乏自我保護意識，承受心理壓力的能力及應(yīng)變能力缺乏等等，造成在相當(dāng)長一段時間內(nèi)不能適應(yīng)工作環(huán)境。因此，在高職院校中加強人文教育，使學(xué)生全面發(fā)展，具有健全人格是十分必要的。
1 以人文教育促進大學(xué)生全面發(fā)展的研究
1.1 轉(zhuǎn)變觀念，樹立全面發(fā)展的教育理念
很多人認(rèn)為高職教育主要是傳授知識，培養(yǎng)技能，是一種“技術(shù)教育”，實際上這種看法是片面的，它忽視了教育的本質(zhì)。誠然，培養(yǎng)技術(shù)型人才是高職院校的教育目標(biāo)，但是我們培養(yǎng)的不能僅僅是一個只懂計算機或只會做帳的人，如果是這樣的話，那么學(xué)校充其量只能是一個培養(yǎng)“工具性”人才的作坊。高職學(xué)校在授予學(xué)生現(xiàn)代科學(xué)知識、技能和理論的同時，應(yīng)對他們進行有效的人文素質(zhì)教育，提高他們的道德水平，教會他們做人之道，使他們真正成為心智與人格全面發(fā)展的有用之才。作為高職教育者應(yīng)該認(rèn)識到高職教育首先是教育、是育人，然后才是職業(yè)教育。教育的首要目的是使人成為“人”，其次才是“才”。為此，高職院校應(yīng)改變以往的只注重技能訓(xùn)練的技術(shù)教育，而轉(zhuǎn)向人的全面發(fā)展的教育。也只有這樣，高職學(xué)校才可能有廣闊的發(fā)展前景。
1.2 實現(xiàn)人文環(huán)境與自然環(huán)境的統(tǒng)一
校園文化場所、校園環(huán)境建設(shè)是校園文化建設(shè)的物質(zhì)載體。加強校園文化建設(shè)，優(yōu)化育人環(huán)境，發(fā)揮環(huán)境育人功能，必須建設(shè)整潔、優(yōu)美、有序的校園環(huán)境，營造濃郁的校園文化氛圍。校園建筑布局合理、設(shè)計新穎、錯落有致、樸素典雅、造型寓意各具特色。校園內(nèi)的道路彎直有形，長廊亭閣、別有風(fēng)味，樹木豐茂、花草宜人，校牌校訓(xùn)、引人注目，櫥窗報欄規(guī)范精致，標(biāo)語宣傳、賦予感召力，辦公室、教室、圖書館、實驗實訓(xùn)場所、體育場館、餐廳宿舍布置協(xié)調(diào)。學(xué)校制定、實施以人為本并符合教育規(guī)律的規(guī)章制度，師生衣著整潔、言行文明、人際關(guān)系和諧，形成良好的校風(fēng)、學(xué)風(fēng)、教風(fēng)、班風(fēng)、作風(fēng)，特別是共同的價值觀念所反映出的學(xué)校精神無時不滲透在師生的行為當(dāng)中，成為引領(lǐng)全體師生奮發(fā)向上的精神力量。
大力開展人文教育，讓豐富多彩的校園文化活動為大學(xué)生提供一個鍛煉、提高和展示自我的舞臺，也為其實踐志趣、擴大交往開辟了一個廣闊天地。校園文化活動內(nèi)容主要包括建設(shè)良好的文化環(huán)境、堅持開展經(jīng)常性活動、開展主題教育活動等，活動中要充分體現(xiàn)“以學(xué)生為本”的思想。校園文化建設(shè)是校園文明建設(shè)和校園精神培育的載體，是豐富學(xué)生業(yè)余文化生活、構(gòu)建精神家園、營造健康心理氛圍的有力保障，也是提高學(xué)生綜合素質(zhì)的重要途徑。高職教育的目的要求高職院校在校園文化活動中，要兼顧學(xué)生的業(yè)務(wù)素質(zhì)和適應(yīng)社會的能力，始終堅持以愛國主義教育為重點，以科技、文娛、體育和社會實踐活動為基礎(chǔ)，以提高學(xué)生的人文素質(zhì)教育為目標(biāo)，努力提高校園文化建設(shè)的品位。開展校園文化活動，除了抓住契機外，還應(yīng)充分挖掘、整合各種合理資源，可發(fā)揮大學(xué)生社團組織的積極作用。
1.3 實行科技教育與人文教育的有機結(jié)合
通過舉行大量的學(xué)術(shù)研討會、專題報告、知識競賽等知識性校園文化活動，擴大學(xué)生的信息量，突破課堂教學(xué)的封閉性，調(diào)整學(xué)生的知識結(jié)構(gòu)，激發(fā)學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣。開展一些娛樂性校園文化活動，如歌詠、書畫等既有利于學(xué)生審美情趣的提高，又有利于拓寬學(xué)生的視野，提高他們的感受力、理解力、想象力，從而提高他們學(xué)習(xí)科學(xué)文化知識的興趣和能力。尤其要注重立足專業(yè)，開展社會調(diào)查、科技創(chuàng)新等實踐活動，鍛煉學(xué)生的實踐能力。這是由高職教育的培養(yǎng)目標(biāo)決定的。
1.4 提高學(xué)生的綜合素質(zhì)
在人文精神教育中，使學(xué)生樹立了敬業(yè)態(tài)度和社會責(zé)任感，增強了精益求精的工作理念和堅忍不拔、知難而進的勃勃向上的精神，這使得學(xué)生在實踐技能上更易超越常人，更易在自由的職業(yè)中做出出色的業(yè)績和貢獻。
人文教育是通過對學(xué)生進行基礎(chǔ)教育達到提高學(xué)生綜合素質(zhì)的目的。通過基礎(chǔ)教育，讓學(xué)生學(xué)會行使權(quán)利與義務(wù)，發(fā)展道德觀與價值觀，培養(yǎng)表達能力、閱讀能力、獨立思考、解決問題和辨別價值標(biāo)準(zhǔn)的能力，了解文化傳統(tǒng)，適應(yīng)并改進所處環(huán)境，保持個人身心健康，發(fā)展理解事物和與人交往的能力。
1.5 利用現(xiàn)代信息技術(shù)增強素質(zhì)教育的吸引力和感染力
大眾傳媒也對學(xué)生的人文素質(zhì)教育起著重大影響。現(xiàn)代媒介形態(tài)的變化促使大眾傳媒逐漸加大其在新聞與娛樂之外的直接教化功能，學(xué)術(shù)演講、文化對話，藝術(shù)星空等性質(zhì)的欄目層出不窮。人們在網(wǎng)絡(luò)、電視屏幕和光盤上閱讀文學(xué)名著，欣賞美術(shù)作品、聆聽名人名家的教誨或者參與對話。以互聯(lián)網(wǎng)為代表的現(xiàn)代傳播工具的普及對大學(xué)生的思想產(chǎn)生了越來越大的影響。人文素質(zhì)教育應(yīng)充分利用這一載體，如熱線電話，建立工作網(wǎng)站，班級主頁，電子信箱，留言板，聊天室等，使人文素質(zhì)教育不再受時間，地點，身份的限制。
馬克思說：“人創(chuàng)造環(huán)境，同樣環(huán)境也創(chuàng)造人?！卑嗉壩幕切@文化的基石，作為一種教育力量和教育環(huán)境，對學(xué)生具有潛移默化的影響和感染力。
（1）班級文化的建設(shè)是學(xué)校建設(shè)的主陣地，是我們農(nóng)村孩子全面發(fā)展的學(xué)習(xí)基礎(chǔ)。小學(xué)是學(xué)生接受教育的啟蒙階段。健康和諧的班級文化，教育熏陶學(xué)生的心靈，活力和青春的班級文化，營造積極向上的班級氛圍。因此，構(gòu)建一個健康向上的班級文化至關(guān)重要。
（2）農(nóng)村小學(xué)學(xué)生生活條件和家庭因素的影響使得學(xué)生的物質(zhì)文化環(huán)境單調(diào)。接觸的事物較少，見識度較狹隘，自由散漫現(xiàn)象普遍存在，文化氛圍缺乏不符合學(xué)生多方面發(fā)展的需要。
2.本課題國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
（1）美國版《班級的群體化過程》在談到如何促進學(xué)生交流、如何解決學(xué)生沖突等方面作了詳細(xì)描述，并提出了改善各類氣氛的行動觀點；最終目標(biāo)是形成一種具有較強協(xié)作精神、共同價值取向及行為方式的班級精神文化，但對班級物質(zhì)文化和制度文化卻很少涉及。
（2）國內(nèi)對班級文化的研究也很多：如魏書生老師利用班級文化對班級實行自動化管理的實踐證明了：積極的班級文化猶如生活中的浪花，記憶中的亮點，有助于促進孩子走向成功。因此，營造良好的學(xué)習(xí)環(huán)境、學(xué)習(xí)機制在我們這種有山區(qū)孩子的農(nóng)村小學(xué)就顯得特別重要。本課題將在這一方面作必要的探索。
二、課題的界定
杜威說：“要想改變學(xué)生，必先改變環(huán)境，環(huán)境改變了，學(xué)生也被改變了”。班級文化是校園文化的基石，作為一種教育力量和教育環(huán)境，對學(xué)生的健康成長和今后發(fā)展有著潛移默化的教育功能。
任何事物都是相輔相成的，魏書生老師也在《構(gòu)建和諧的班級文化》中指出健康高雅的班級文化對于提高學(xué)生的思想道德素質(zhì)，發(fā)展學(xué)生的智能，增進學(xué)生的身心健康有積極的意義和特殊的功能。從而，證明一個健全的富有特色的班級文化氛圍促進學(xué)生的全面發(fā)展。
三、課題研究的意義
（一）目的
能利用各種班級教育環(huán)境資源，打造健康高雅的班級文化，那么就會營造出適合學(xué)生發(fā)展的良好育人氛圍，從而達到陶冶學(xué)生情操，滋養(yǎng)學(xué)生心靈，提高學(xué)生素養(yǎng)，促進學(xué)生健康成長的目的。
具體來說要達到以下目標(biāo)：
1.班級物質(zhì)文化建設(shè)目標(biāo)：營造氛圍，凸顯理念。板報墻面的提醒與鼓勵，窗臺角落的生機與勃發(fā)。為學(xué)生營造和諧健康的學(xué)習(xí)環(huán)境。
2.班級精神文化建設(shè)目標(biāo)：潛移默化，浸潤升華。通過確定班級的奮斗目標(biāo)、班歌、班訓(xùn)等培育良好的班風(fēng)。主題班會的影響與促進，塑造積極向上的班級精神。優(yōu)秀群體的榜樣和引領(lǐng)，升華學(xué)生的人格，陶冶學(xué)生的情操。
3.班級制度文化建設(shè)目標(biāo)：規(guī)范行為，確立保障。實行班干部負(fù)責(zé)制，抓好課堂管理；同時開展每日監(jiān)督機制，關(guān)注重點生的動態(tài)，有效遏制不良風(fēng)氣的擴散，落實班級自主管理。從而促進學(xué)生的全面發(fā)展。
（二）意義
以班級文化建設(shè)為載體，通過各種途徑探索一套能引領(lǐng)學(xué)生蓬勃發(fā)展的的班級文化。開拓學(xué)生的視野、陶冶學(xué)生的情操、激發(fā)學(xué)生的創(chuàng)造性。讓師生成為這種文化的主體、建設(shè)者，又成為這種文化的受益者，從而形成良好的班風(fēng)、學(xué)風(fēng)，促使我們山區(qū)學(xué)生在濃郁的班級文化氛圍中充分感染、自由創(chuàng)造、自求上進、團結(jié)友善。成為有理想、有道德、有文化、有紀(jì)律的一代新人。
積極向上的班級文化，能豐富孩子的學(xué)習(xí)生活，陶冶學(xué)生的情感，凈化學(xué)生的心靈，并有助于學(xué)生的個性發(fā)展和素質(zhì)的提高，潛能得到挖掘，智慧之光得到閃爍創(chuàng)造力得到提升，主人翁意識得到強化，各種情感得到升華。積極的班級文化猶如生活中的浪花，記憶中的亮點。讓班級成為學(xué)生學(xué)習(xí)的集體，讓班級成為學(xué)生向往的樂園，從而促進孩子的全面發(fā)展。
四、課題研究的理論依據(jù)
馬克思說：“人創(chuàng)造環(huán)境，同樣環(huán)境也創(chuàng)造人?！卑嗉壩幕切@文化的基石，作為一種教育力量和教育環(huán)境，對學(xué)生具有潛移默化的影響和感染力。
魏書生老師在《構(gòu)建和諧的班級文化》中指出健康高雅的班級文化對于提高學(xué)生的思想道德素質(zhì)，發(fā)展學(xué)生的智能，增進學(xué)生的身心健康有積極的意義和特殊的功能。
五、研究的方法：
1.行動研究法。通過對班級文化的分析與研究，制定具體的研究計劃，開展實踐，并在實施計劃中不斷改進研究工作。
2.調(diào)查法。通過調(diào)查班級文化現(xiàn)狀找出存在的問題，在計劃實施的再調(diào)查，又為后續(xù)研究工作提供了真實具體的材料，便于評估研究成果，通過訪談、問卷、測試等方法，搜集相關(guān)資料進行分析研究。
3.文獻研究法。查閱相關(guān)資料，摸索新課程與班級文化建設(shè)的關(guān)系，并恰當(dāng)把理論與實踐結(jié)合起來。
4.經(jīng)驗總結(jié)法。對課題研究情況和取得的成果進行全面總結(jié)，對經(jīng)驗進行思維加工，以探討其普通意義。
六、課題研究的具體操作和申報
1.對農(nóng)村小學(xué)班級文化現(xiàn)狀進行調(diào)查
（1）通過問卷調(diào)查等形式。
（2）了解學(xué)生對班級文化的認(rèn)識。
（3）學(xué)生對班級文化的心理需求。
2.調(diào)查班級的現(xiàn)有文化設(shè)施
3.班級文化建設(shè)影響學(xué)生成長的實踐經(jīng)驗進行分析概括
（1）分析班級文化現(xiàn)狀。
（2）了解對班級文化對學(xué)生有哪些影響。
（3）調(diào)查班主任對班級文化的認(rèn)識
4.歸納總結(jié)特色班級文化特色建設(shè)的策略
（1）創(chuàng)設(shè)鮮明的班級特色物質(zhì)文化感染學(xué)生，引導(dǎo)學(xué)生。陶冶學(xué)生的情操，激發(fā)學(xué)生熱愛集體的情感，促進學(xué)生奮發(fā)向上。
（2）制定嚴(yán)明的班級文化制度指導(dǎo)學(xué)生，規(guī)范學(xué)生。其運作程式可以是組織學(xué)生民主制定班級一日常規(guī)，師生共同擬定考評細(xì)則等，另外，要改變班干部的任選制度，為每一個學(xué)生創(chuàng)設(shè)一個既是管理者又是被管理者的生動活潑的組織情境，從而確保班級管理制度的民主化、人文化。
