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時(shí)間：2023-03-13 11:04:58
序論：好文章的創(chuàng)作是一個(gè)不斷探索和完善的過程，我們?yōu)槟扑]十篇故鄉(xiāng)的小路范例，希望它們能助您一臂之力，提升您的閱讀品質(zhì)，帶來更深刻的閱讀感受。
夏天的時(shí)候,這條小路就是通往田野的必經(jīng)之路,就算是牛的話,也要走這條路才能到田里去耕地,在這條小路的旁邊,都有幾個(gè)“士兵”守侯著,一下子就變得很涼爽了,我和爺爺常常到和我人差不多深的小河去游泳。
哦，親愛的小草！你好！我坐了下來，嘴里含著一根草，酸酸的，抬頭看著藍(lán)藍(lán)的天空飄過白白的云朵。那云朵像一個(gè)胖乎乎的娃娃，又像甜甜的棉花糖。小時(shí)候，我曾經(jīng)做夢(mèng)來到了天空，哦，那朵云，是我騎在你的身上嗎？云兒，你在天空呆得寂寞嗎？下來和我一起玩玩吧！
路旁有一條小溪?，F(xiàn)在水庫沒放水，小溪就干涸了。我捧起了一把河里的土，啊，軟綿綿的，多么舒服??！小時(shí)候，我還用泥土開了一家“蛋糕店”呢，那小小的蛋糕就是泥巴做的，上面用小草、小花點(diǎn)綴著，頗有一種“藝術(shù)感”。想著想著，我感到非常的親切。瞧，小貝殼！是呀，這可愛的小貝殼隱藏在泥土里，靜靜地睡著。記得去年的五一節(jié)，我們挖了好多的貝殼，還吃了貝殼呢！那味道真不錯(cuò)！
訪完小溪，我們?nèi)タ纯次业睦吓笥选锇桑√锢镎L著青青的蒜苗，小時(shí)候我經(jīng)常去蒜苗田里，用蒜苗的葉子制作成一個(gè)個(gè)裝飾品，不論它有多么的難看，我還是十分喜歡它。田里經(jīng)常會(huì)有一些小蟲子，我對(duì)這些小蟲特別感興趣，總會(huì)趴下來看個(gè)究竟。我站在蒜苗田里，感受著雨的氣息，今天是陰雨天，可是我感到了雨中夾雜著一絲絲的快樂。
夏天的小路我最喜歡了。路旁姹紫嫣紅的，還有陣陣芳香。在赤日炎炎的夏日，我最喜歡找?guī)讉€(gè)伙伴在那曲折的小路上奔馳，我們歡呼，我們奔跑，在童話王國的小路上盡情釋放童年的歡樂。
秋天的小路飽含詩意，片片樹葉飄飄灑灑的落下，我經(jīng)常去那里采集樹葉，放在書里，每一頁放一片，過一陣子，拿書便發(fā)出清新的味道，即使到了冬天，也能回味秋的芳香。
說到冬天更是別有一番情趣。一入冬，雪就揮揮灑灑的飄落下來，花兒怕冷，去冬眠了，柳樹卻不怕，冰冷的雪非常感動(dòng)，用自己的身軀給它做衣服。那條路比較偏僻，一般很少有車經(jīng)過，我們就在那打雪仗，堆雪人……，非常有意思。
年少青春的時(shí)節(jié)，我曾無數(shù)次被這溫情的歌詞所感動(dòng)，只是沒想到有朝一日真的能來到這曾經(jīng)讓我魂?duì)繅?mèng)繞的地方。
當(dāng)載著我們的大巴緩緩駛進(jìn)古鎮(zhèn)，我竟莫名地有一種親切感。窄窄的小馬路，沿途簡樸的小店面，隨處可見的媽祖廟……怎么都有似曾相識(shí)的感覺呢？是了，這正是我那多愁善感的青春時(shí)光里，無數(shù)次地想象過的小鎮(zhèn)風(fēng)情。
下了車，我沒有先走最熱鬧的地段，而是直奔街角的那家包子鋪，買了導(dǎo)游小羅口中“超好吃”的肉包。極白的面皮，甜甜的肉餡，混雜著香菇淡淡的香味，清爽而不油膩，一如鹿港小鎮(zhèn)給人的印象，清新質(zhì)樸。我邊吃邊沿著小街往前走，這才發(fā)現(xiàn)這是一條極安靜的小街。路上行人稀少，兩邊是舊時(shí)的建筑，木質(zhì)的大門，斑駁的土墻，留著歷史的痕跡。我慢悠悠地從馬路中間穿行而過，似時(shí)光倒流，如此靜謐，如此安逸。
走完一圈，我轉(zhuǎn)過身，去往小鎮(zhèn)最著名的媽祖廟——天后宮。那也是羅大佑歌里吟唱的：“廟里膜拜的人們依然虔誠?！?/p>
這一路走去，便熱鬧了許多。兩邊布滿了特色小吃店，蚵仔煎、蝦猴、花枝酥、現(xiàn)打果汁……走到天后宮，我發(fā)現(xiàn)它和我想象中的相距甚遠(yuǎn)，沒有金碧輝煌的裝飾，沒有恢宏的氣派，卻有一種家常的、樸素的氣息，和小鎮(zhèn)的風(fēng)情一脈相承。想來，小鎮(zhèn)里的阿公、阿嬤應(yīng)該都是這里的?？?，有了什么煩惱，有了什么心愿，都會(huì)到這里來和媽祖娘娘傾訴一番。
終于要結(jié)束鹿港小鎮(zhèn)之行了。步往回程的路上，我買了一袋臺(tái)灣特產(chǎn)水果——鳳梨。那個(gè)擺攤的中年大叔，一邊找錢，一邊連聲道謝。于是，我心里莫名地又溫暖起來。
鹿港的單純，鹿港的淳樸，鹿港的原味，是無數(shù)游子心中故鄉(xiāng)的濃縮。在繁華的都市，在每天來去匆匆的腳步中，其實(shí)每個(gè)人的心里都向往著那么一小方天地，那里匯聚著溫情、本真、單純的快樂，一如鹿港小鎮(zhèn)。
[中圖分類號(hào)]R318[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A[文章編號(hào)]1008-6455（2011）04-0581-05
Repairing goat skull clinical defects with tissue engineering bones constructed by a biphasic seeding strategy with platelet-rich plasma
LEI Hua,TANG Xiao-Jun,PENG Zhe,NIU Feng,YU Bing,SHEN Shun-ying,GUI Lai
(The Sixth Department of Plastic Surgery Hospital,Peking Union Medical College,China Academy of Medical Sciences,Beijing 100144,China)
Abstract:ObjectiveTo confirm whether platelet-rich plasma (PRP) biphasic seeding strategy can significantly enhance the osteogenesis in vivo, compared with common biphasic seeding and traditional dropping seeding.MethodsTo construct tissue engineering bones with PRP biphasic seeding, common biphasic seeding and traditional dropping seeding respectively. To repair the goat skull clinical defects with the three groups of tissue engineering bones. At 3 days and 3 months postoperatively, goat skulls were examined by CT scanning, the pictures were analyzed by the Osirix software. Following CT scanning at 3 months postoperatively, animals were executed, the skull samples were harvested and examined histologically.ResultsThe new bone amount of the group of PRP biphasic seeding was significantly more than the groups of common biphasic seeding and traditional dropping seeding (P0.05).ConclusionThe PRP biphasic seeding was safe, efficient and practical. The tissue engineering bone constructed by the PRP biphasic seeding strategy can improve the osteogenesis in vivo.
Key words：platelet-rich plasma;cell seeding;bone tissue engineering;skull defect
骨組織工程雖已被用于臨床，但是仍存在一些問題，如細(xì)胞與三維多孔支架材料如何能有效結(jié)合的問題。傳統(tǒng)的細(xì)胞接種方法，是將細(xì)胞懸液直接滴加在材料表面。這種方法簡便、適合于各種細(xì)胞和支架，但是如果三維多孔支架具有疏水性或親水性不強(qiáng)，不能像海綿一樣將細(xì)胞懸液吸入內(nèi)部，大量細(xì)胞懸液流失。有時(shí)就算細(xì)胞懸液進(jìn)入支架內(nèi)部的孔洞里，由于沒有足夠的孔壁貼附，很多細(xì)胞液流失了[1-3]。所以有學(xué)者利用雙相接種法提高細(xì)胞和三維多孔支架的結(jié)合，也就是將細(xì)胞與纖維蛋白原或膠原液體混合，滴加或灌注于支架上，隨即滴加促凝劑，使纖維蛋白原或膠原凝固成膠凍狀，將細(xì)胞固定在支架表面或內(nèi)部，提高了細(xì)胞的接種效率[4-14]。本研究也預(yù)用雙相接種法構(gòu)建組織工程骨，但是用富含血小板血漿（platelet-rich plasma PRP）代替纖維蛋白原和膠原重懸細(xì)胞，原因是PRP不僅與纖維蛋白原和膠原一樣具有雙相性，在促凝劑的作用下從液態(tài)變?yōu)槟z凍狀，而且含有大量血小板，血小板可被促凝劑激活釋放大量活性因子，其中包含多種生長因子，可以促進(jìn)組織愈合等一系列生物事件[15-16]。所以我們推測(cè)PRP雙相接種法構(gòu)建的組織工程骨可能進(jìn)一步促進(jìn)骨形成。為證實(shí)此假設(shè)，本研究分別用PRP，自體纖維蛋白原（platelet-poor plasma PPP），傳統(tǒng)靜滴法構(gòu)建組織工程骨，修復(fù)山羊顱骨缺損，觀察體內(nèi)骨形成情況。
1材料和方法
1.1 BMSCs原代培養(yǎng)及傳代：于一只中國青山羊（5月，10 kg）髂后上嵴抽取5ml骨髓（肝素抗凝）。15ml離心管中加入5ml人淋巴細(xì)胞分離液（Boster，武漢），將5ml骨髓沿管壁緩緩注入。200g離心，10min。取中層移至25cm2培養(yǎng)瓶中（Corning, Germany），加入高糖DMEM（Hyclone，USA）4ml，其中含有10% FBS（Hyclone，USA），100 U/ml 青霉素（Sigma，China），100mg/ml 鏈霉素（Sigma，China）。37℃，5% CO2，孵育4 天，換液。繼續(xù)孵育，3 天換一次液。待細(xì)胞90%融合時(shí)，0.25%胰酶（Sigma，China）消化、收集細(xì)胞至15ml離心管中，200g離心，10 min，棄上清液，DMEM重懸細(xì)胞團(tuán)，以5 000/cm2的密度接種于75cm2培養(yǎng)瓶中，加入10ml培養(yǎng)基，37℃，5% CO2孵育，每3 天換液一次。一般第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。
1.2PRP和PPP的制備：配置抗凝劑ACD：0.48g檸檬酸，1.32g檸檬酸鈉，1.47g葡萄糖（中國阿拉丁試劑有限公司）溶于100ml雙蒸水中，0.45μm過濾消毒，冷藏備用。于一只中國青山羊（5月，10kg）頸靜脈抽取全血40ml，其中加入40ml ACD，搖勻，移入50ml離心管，1 000g離心，15min。取上層血漿，棄紅細(xì)胞，二次離心，3 000g，20min。上層為清亮的PPP，移入另一15ml離心管中備用。中間層為白色的血小板，輕輕用吸管攪動(dòng)吸出移至另一離心管中，下層紅細(xì)胞棄之。用少量PPP將血小板重懸，人工血小板計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)成濃度為106/μl的PRP備用[17-19]。
1.3 PLGA支架預(yù)處理：PLGA支架由濟(jì)南岱罡生物科技有限公司提供。PLA：PGA=75：25?？讖酱笮?00～300μm，空隙率80%。用11號(hào)尖刀片將大塊PLGA切成直徑11mm厚3 mm的圓盤狀。使用前，PLGA圓盤浸泡于75%酒精中24h，PBS漂洗3次，DMEM孵育30 min，取出置于無菌紗布上，吸干水分，再滴加細(xì)胞懸液，以增加PLGA的親水性。
1.4 細(xì)胞/支架復(fù)合體修復(fù)山羊顱骨缺損：中國青山羊8只，7～8月，17～20kg。隨機(jī)分成4組，2只/組。用牙科鉆在顱頂部制造2個(gè)直徑2cm全層顱骨缺損，去除局部骨膜，保護(hù)硬腦膜完整。4組動(dòng)物分別用以下方法修復(fù)顱骨缺損：①對(duì)照組，不修復(fù)，直接分層縫合切口；②DMEM組，用DMEM重懸細(xì)胞（2×107/ml），每塊PLGA支架滴加500μl細(xì)胞懸液，植入顱骨缺損區(qū)，不固定，縫合切口；③PPP組，用PPP重懸細(xì)胞（2×107/ml），每塊PLGA支架滴加500μl細(xì)胞懸液，100μl 凝血酶促凝，植入顱骨缺損區(qū)；④PRP組，用PRP重懸細(xì)胞（2×107/ml），其余同PPP組。術(shù)后常規(guī)肌注抗生素，青霉素鈉 160萬U，2次/日，共3天。圖1示手術(shù)過程。
1.5 山羊顱骨缺損修復(fù)前后影像學(xué)檢查：術(shù)后3天及8周行山羊頭顱螺旋CT (Siemens Somatom 16， Germany) 掃描檢查，140 kV，130 mA，層厚1.5mm。用Osirix 軟件分析，計(jì)算新生骨的體積，并進(jìn)行三維重建。
1.6 山羊顱骨缺損修復(fù)8周后組織學(xué)檢查：術(shù)后8周，頭顱螺旋CT檢查結(jié)束后，處死動(dòng)物，用牙科鉆鉆取顱骨缺損區(qū)樣本，取材范圍包括顱骨缺損周邊2mm正常顱骨在內(nèi)的所有區(qū)域。樣本放入4%的甲醛中固定48h，然后酒精逐級(jí)脫水，樹脂包埋，硬組織切片機(jī)（Leica SM2500，Heidelberg，Germany）切片，厚度40μm，HE染色，光學(xué)顯微鏡（Leica DM3000，Germany）觀察拍照。Osirix 軟件分析，計(jì)算各組代表性切片新生骨面積。
1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：每個(gè)數(shù)值以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較用單因素方差分析（one-way ANOVA）及Tukey's test 。設(shè)P
2結(jié)果
2.1 BMSCs/PLGA復(fù)合體修復(fù)顱骨缺損影像學(xué)觀察：8只山羊平穩(wěn)度過8周觀察期。CT平掃（圖2）和三維重建 (圖3) 顯示：8周時(shí)，PRP組，顱骨缺損部分愈合，缺損明顯縮小，新生骨不僅從缺損區(qū)邊緣向中心長入，在缺損的中心部位也有骨島形成。PPP組和DMEM組只有從缺損邊緣的長入的新生骨，而沒有中心部位硬腦膜表面的骨島形成。空白對(duì)照組幾乎沒有新生骨形成。
各組平均新生骨體積見表1。PRP組的新生骨體積 (0.1660±0.03650)cm3顯著高于其他3組(P0.05)。對(duì)照組 (0.0219±0.00917)cm3 的新生骨顯著低于其他3組 (P
2.2BMSCs/PLGA復(fù)合體修復(fù)顱骨缺損組織學(xué)檢查：8周處死動(dòng)物解剖標(biāo)本時(shí)，肉眼可見所有細(xì)胞/支架復(fù)合體植入處無炎癥反應(yīng)，無纖維薄膜形成，PLGA材料幾乎全部吸收。硬組織切片顯示（圖4）：空白對(duì)照組沒有新骨形成，缺損區(qū)為疏松結(jié)締組織，缺損邊緣的膠原纖維較中心部致密。DMEM組、PPP組和PRP組的表現(xiàn)同影像學(xué)圖片。DMEM組和PPP組均有新生的骨島位于缺損區(qū)邊緣，中心部位均為纖維結(jié)締組織，PPP組的膠原纖維較DMEM組致密。PRP組缺損區(qū)邊緣的新生骨島較DMEM和PPP組大而多，中心區(qū)域也可見到新生骨島，其他部位為致密的纖維結(jié)締組織。
各組切片平均新生骨面積見表2?？瞻讓?duì)照組的新生骨面積（0.1782±0.08006）cm2明顯少于其他3組(P
3討論
實(shí)驗(yàn)中8只山羊均平穩(wěn)渡過整個(gè)觀察期，術(shù)后8周取標(biāo)本時(shí)，可見山羊頭皮傷口愈合良好，無紅腫熱痛，頭皮下方組織無充血水腫，組織切片顯示無明顯炎癥細(xì)胞浸潤、血管增生等，支架材料均被吸收，顱骨缺損處已被新生骨和纖維組織覆蓋，這說明PRP和PLGA支架修復(fù)體內(nèi)骨缺損是安全有效的。
CT冠狀位平掃和三維重建圖片以及組織學(xué)切片都顯示用PRP構(gòu)建的組織工程骨修復(fù)山羊顱骨缺損，較PPP雙相接種法（普通雙相接種法）和傳統(tǒng)靜滴法構(gòu)建的組織工程骨有更多的新骨形成。這可能是PRP中的血小板促進(jìn)植入的BMSCs的增殖分化、趨化宿主基質(zhì)細(xì)胞并促其增殖分化、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)分泌和血管再生，最終使相應(yīng)的組織再生修復(fù)創(chuàng)傷[20]。盡管，這個(gè)復(fù)雜的生物過程還沒有被完全解析，但從我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以肯定血小板在體內(nèi)骨形成中有一定的促進(jìn)作用，PRP也較PPP更適合做為雙相接種的媒介。
以往的研究表明，當(dāng)PRP與BMSCs混合修復(fù)犬下頜骨缺損[17]和兔顱骨缺損時(shí)[21]，較單純PRP或自體骨顆粒更能促進(jìn)體內(nèi)新骨形成；當(dāng)PRP與BMSCs和凍干異體骨顆?；旌闲迯?fù)兔股骨遠(yuǎn)端髁狀突缺損時(shí)，表現(xiàn)出較好的促進(jìn)骨愈合和骨塑性過程[22]；在上頜竇充填、竇底提升時(shí)，PRP與BMSCs的混合物較單純松質(zhì)骨顆粒或單純PRP更能促進(jìn)骨再生[23]。這些研究結(jié)果均表明PRP在有BMSCs存在時(shí)可以促進(jìn)骨再生。但是這些研究均是將PRP與細(xì)胞或自體骨顆粒直接混合植入受區(qū)發(fā)揮成骨作用，而本研究首次將PRP做為接種媒介將細(xì)胞與三維多孔支架結(jié)合，構(gòu)建組織工程骨，修復(fù)骨缺損。這為骨缺損的三維個(gè)性化修復(fù)中，細(xì)胞與三維多孔支架的復(fù)合提供新思路。
根據(jù)以往文獻(xiàn)報(bào)道，雙相接種法的細(xì)胞接種效率顯著高于傳統(tǒng)靜滴法[8-11]，所以我們推測(cè)PPP組植入細(xì)胞初始量較多，成骨也應(yīng)較多，但本研究結(jié)果顯示PPP雙相接種法與傳統(tǒng)接種法構(gòu)建的組織工程骨在體內(nèi)成骨數(shù)量沒有差異，這說明組織工程骨在體內(nèi)的成骨不單純與植入細(xì)胞的初始量有關(guān)，與細(xì)胞植入后的增殖分化、宿主基質(zhì)干細(xì)胞的趨化移入、骨缺損局部微環(huán)境，等等因素均密切相關(guān)，也正因如此，PRP中的血小板的生物作用顯得非常重要。不過PPP雙相接種法沒有顯示出較傳統(tǒng)靜滴法的優(yōu)勢(shì)，也可能與實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)間短（8w）或樣本量小有關(guān)(n=4)。這些都有待于深入研究。
本研究的觀察時(shí)間較短(3月)，也許隨著時(shí)間延長，各組的成骨數(shù)量和質(zhì)量會(huì)變得沒有差異，但本實(shí)驗(yàn)至少可以說明PRP可在早期促進(jìn)骨形成。
4結(jié)論
本研究結(jié)果顯示，由于PRP中大量血小板的存在，用PRP介導(dǎo)的雙相接種法構(gòu)建組織工程骨在體內(nèi)早期成骨顯著；而且PRP很容易地由自體全血經(jīng)兩步離心獲得，無毒、無免疫源性，所以PRP雙相接種法是一個(gè)安全、實(shí)用、高效的細(xì)胞接種方法，可以有效輸送細(xì)胞至三維多孔支架內(nèi)的同時(shí)，輸送自體生物因子，其中包括很多種生長因子。
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摘 要：［目的］探討辛伐他汀對(duì)體外甲狀旁腺素相關(guān)肽（PTHrP）誘導(dǎo)小鼠的破骨細(xì)胞骨吸收功能的作用及其小鼠骨代謝的影響。［方法］采用PTHrP誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞培養(yǎng)破骨細(xì)胞和小鼠顱蓋骨培養(yǎng)體系，檢測(cè)辛伐他汀作用8 d后破骨細(xì)胞骨吸收陷窩和培養(yǎng)上清鈣的變化；檢測(cè)小鼠顱蓋骨培養(yǎng)上清堿性磷酸酶和鈣含量，組織學(xué)觀察小鼠顱蓋骨形態(tài)學(xué)變化。［結(jié)果］辛伐他汀體外可明顯抑制PTHrP誘導(dǎo)小鼠的破骨細(xì)胞骨吸收陷窩的形成及培養(yǎng)上清鈣的釋放，辛伐他汀體外可增強(qiáng)小鼠顱蓋骨培養(yǎng)上清堿性磷酸酶的活性，組織學(xué)觀察到辛伐他汀使小鼠顱蓋骨礦化增強(qiáng)。［結(jié)論］辛伐他汀體外不僅可促進(jìn)小鼠顱蓋骨的成骨活性，并且可明顯抑制PTHrP誘導(dǎo)小鼠的破骨細(xì)胞骨吸收功能，對(duì)骨吸收性疾病有著重要的防治作用。
關(guān)鍵詞：辛伐他汀; 破骨細(xì)胞; 骨吸收; 甲狀旁腺素相關(guān)肽（PTHrP）
Abstract：［Objective］To study the effect of simvastatin in the osteoclastic resorption stimulated by PTHrP and murine bone anabolism in vitro［Method］The bone resorption activities of the osteoclast stimulated by PTHrP were evaluated after treatment with simvastatin for 8 days in vitro;the concentration of Ca2+ in the supernatant was also detected by atomic absorption spectrometerThe concentration of ALP and Ca2+ of the supematant in murine calvarial organ culture were detectedThe histology of calvaria was observed［Result］Simvastatin greatly inhibited the osteoclastic bone resorption stimulated by PTHrP in vitro and reduced the release of Ca2+Simvastatin increased the ALP activities and bone mineralization of murines calvarial organ culture in vitro［Conclusion］Simvastatin may inhibit the osteoclasric resorption stimulated by PTHrP and promote osteoblast differentiation and bone mineralization in vitro，thus play an important role in the prevention and treatment of osteoporosis
Key words：Simvastatin; Osteoclast; Bone resorption; PTHrP
他汀類藥物由于抑制了膽固醇代謝中甲羥戊酸途徑的HMGCoA（3Hydroxy3MethylglutarylCoenzyme A）還原酶活性，具有明顯的降血脂作用，目前是一種廣泛用于臨床的降脂藥。1999年Mundy等〔1〕在篩選了3萬多種化合物后發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物是唯一能促進(jìn)成骨細(xì)胞BMP2熒光報(bào)告基因活性的物質(zhì)。進(jìn)一步的研究表明他汀類藥物可促進(jìn)成骨細(xì)胞系MC3T3E1及大鼠骨髓細(xì)胞的堿性磷酸酶活性和骨質(zhì)的礦化〔2、3〕，并且可促進(jìn)骨質(zhì)疏松大鼠新生骨的形成〔4〕。在正常生理?xiàng)l件下骨吸收與骨形成處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)中，一旦這種平衡被打破將可能會(huì)導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生。破骨細(xì)胞是骨吸收的功能細(xì)胞，其吸收功能的亢進(jìn)與活躍在骨質(zhì)疏松中具有重要的意義。盡管以往有研究表明，他汀類藥物可能通過促進(jìn)成骨細(xì)胞BMP2基因的表達(dá)來促進(jìn)骨生成，但其對(duì)正常成熟破骨細(xì)胞的骨吸收功能影響尚未見有報(bào)道。本研究采用體外PTHrP誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞形成破骨細(xì)胞的培養(yǎng)體系，以及小鼠顱蓋骨骨培養(yǎng)，探討辛伐他汀對(duì)破骨細(xì)胞性骨吸收及其小鼠骨代謝的影響，為闡明他汀類藥物對(duì)骨質(zhì)疏松的防治作用提供新的理論依據(jù)。
1 材料和方法
11 主要試劑和動(dòng)物
辛伐他汀原料藥（simvastatin），由山東魯南制藥集團(tuán)提供（生產(chǎn)批號(hào)：050502）。甲狀旁腺素相關(guān)肽（PTHrP）：美國Cytolab公司；αMEM培養(yǎng)基，美國Gibco公司；胎牛血清（FCS），Hycolon公司；抗酒石炭酸染色試劑盒，日本Hokudo株式會(huì)社。BalB／C小鼠（清潔級(jí)）：由第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
12 方 法
121 骨薄片的制作
新鮮牛股骨干皮質(zhì)骨25％戊二醛固定，以低速鋸式切片機(jī)橫切，手鋸修成1 cm×1 cm×1 cm大小，leica硬組織切片機(jī)切成30 μm厚度的薄片，100目木砂紙上打磨，梯度酒精脫水，稀氨水超聲波清洗10 min×3次，鈷60照射消毒。
122 破骨細(xì)胞分離及培養(yǎng)
出生4～6周雄性的Balb／C小鼠，脫頸處死后，750 ml／L乙醇浸泡5 min。取雙側(cè)股骨和脛骨，清除軟組織和兩端骨骺，用不含血清的αMEM培養(yǎng)液沖洗髓腔，收集骨髓細(xì)胞并用培養(yǎng)液洗滌兩次，然后將細(xì)胞重懸浮于含100 ml／L胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，配成15×109 L-1的細(xì)胞懸液，24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔2 ml，在50 ml／L CO2的37 ℃孵箱中培養(yǎng)。每2 d更換1次培養(yǎng)液，每次換液時(shí)，移去1ml舊的培養(yǎng)液，補(bǔ)充等量新的培養(yǎng)液。培養(yǎng)6~8 d。
123 辛伐他汀的添加
共分4組：陽性對(duì)照組，在換培養(yǎng)液時(shí)每培養(yǎng)孔中加入45 ng／ml PTHrP：實(shí)驗(yàn)組每培養(yǎng)孔在換培養(yǎng)液時(shí)加入45 ng／ml PTHrP和分別加入10-5、10-6、10-7 mol／L辛伐他汀，每組2孔，分別有1孔放有骨磨片1個(gè)。
124 抗酒石酸染色
染色時(shí)，培養(yǎng)板中貼壁的細(xì)胞進(jìn)行抗酒石酸染色（TRAP染色），培養(yǎng)6 d后，小心移去培養(yǎng)液，用磷酸緩沖液（PBS）洗滌后，按說明書操作，首先用乙醇-丙酮（1∶1）混合液固定5 min后，去離子水洗滌3次，然后加入底物和染色質(zhì)的混合液，37 ℃孵箱中溫育20～60 min，見染色良好后，移去反應(yīng)液，去離子水洗滌以終止反應(yīng)，室溫過夜干燥。
125 破骨細(xì)胞計(jì)數(shù)
倒置顯微鏡下，所有3個(gè)或3個(gè)以上細(xì)胞核的抗酒石酸染色陽性的巨大細(xì)胞均為破骨細(xì)胞。其他細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞抗酒石酸染色均為陰性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)5次，結(jié)果表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差。
126 破骨細(xì)胞吸收功能的測(cè)定
培養(yǎng)6 d后，取出骨磨片，去離子水沖洗3遍，甲醛固定液固定，甲苯胺藍(lán)染色，并用掃描電鏡觀察，骨磨片的吸收陷窩。
127 原子分光光度計(jì)測(cè)鈣
在培養(yǎng)7 d取培養(yǎng)液上清，采用PE 3060原子吸收光譜儀測(cè)鈣含量；條件為：波長3224 nm，燈電流75 mA，光譜寬度26 nm，空氣壓力16×105 Pa，乙炔氣壓力03×105 Pa。
13 辛伐他汀對(duì)小鼠顱蓋骨骨代謝的影響
131 BalB／C小鼠顱蓋骨的分離和培養(yǎng)
出生1周的Ba1B／C小鼠用700 ml／L乙醇浸泡5 min，PBS液洗去乙醇，無菌剪開頭皮，取顱骨，去凈顱骨內(nèi)外表面的骨膜及軟組織，沿冠狀縫和人字縫剪開，完整分離左右頂骨，置入含有100 ml／L胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中，預(yù)培養(yǎng)24 h后將顱蓋骨置入24孔培養(yǎng)板孔內(nèi)；每孔加入2 ml重懸浮于含100 ml／L胎牛血清的αMEM培養(yǎng)液中，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，配成15×109 L-1的骨髓細(xì)胞懸液；共分4組：陽性對(duì)照組。在換培養(yǎng)液時(shí)每培養(yǎng)孔中加入45 ng／ml PTHrP，實(shí)驗(yàn)組每培養(yǎng)孔在換培養(yǎng)液時(shí)加入45 ng／ml PTHrP和分別加入10-5、10-6、10-7 mol／L辛伐他汀。
132 培養(yǎng)上清原子能分光光度計(jì)測(cè)鈣
小鼠顱蓋骨體外培養(yǎng)8 d取上清，測(cè)定上清液中鈣的含量，方法同上。
133 培養(yǎng)液上清測(cè)定堿性磷酸酶活性
小鼠顱蓋骨體外培養(yǎng)8 d取上清，用堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒在日立7170全自動(dòng)生化分析儀上檢測(cè)堿性磷酸酶活性。
134 石蠟切片的制備及組織學(xué)觀察
取培養(yǎng)8 d的顱蓋骨，固定液固定，石蠟包埋，切片厚5 μm，HE染色，在Leico LA（德國）全自動(dòng)顯微鏡和Pixaev數(shù)碼采集系統(tǒng)組成的圖像分析儀系統(tǒng)下采集圖像，分析骨面積（圖1）。
14 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
所有數(shù)據(jù)采用SPSS 100統(tǒng)計(jì)軟件包處理，進(jìn)行t檢驗(yàn)。
2 結(jié) 果
21 辛伐他汀對(duì)PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成和功能的影響
211 辛伐他汀對(duì)PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成的作用
5次試驗(yàn)所得結(jié)果顯示，01 μmol/L的辛伐他汀明顯抑制破骨細(xì)胞的形成，1 μmol/L濃度下，幾乎完全抑制PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成（表1、圖1）。表1 辛伐他汀對(duì)PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成的影響骨磨片在對(duì)照組和辛伐他汀10-5、10-6mol/L組均無明顯的吸收陷窩形成，只有在辛伐他汀0、10-7mol/L兩組有吸收陷窩的形成，并且在無辛伐他汀組的吸收陷窩形成較多（圖2~4）。
213 培養(yǎng)上清測(cè)鈣的結(jié)果
PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞6 d，上清鈣含量提示，在辛伐他汀濃度為10-5、10-6、10-7 mol／L時(shí)，用藥組明顯少于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，隨著藥物濃度的增加鈣含量降低（表2）。表2 辛伐他汀對(duì)體外PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞培養(yǎng)液上清鈣含量的影響
221 培養(yǎng)上清堿性磷酸酶和Ca2+含量測(cè)定結(jié)果
測(cè)定小鼠顱蓋骨體外培養(yǎng)第8 d上清液中ALP的活性，提示用辛伐他汀組在濃度10-5、10-6mol/L時(shí)上清中ALP的活性明顯升高，與對(duì)照組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，辛伐他汀在10-7mol/L時(shí)ALP的活性與對(duì)照組比較差異則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;原字分光光度計(jì)測(cè)定Ca2+含量，用辛伐他汀各組與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（表3）。表3 辛伐他汀體外對(duì)小鼠顱蓋骨培養(yǎng)液上清中Ca+和ALP的影響
22 組織學(xué)觀察
小鼠顱蓋骨培養(yǎng)8 d，可見對(duì)照組骨組織吸收明顯，用Simvastatin治療組，Simvastatin濃度在10-5、10-6、10-7 mol／L時(shí)，可見骨質(zhì)吸收明顯減輕，骨質(zhì)較致密（圖5、6）。
圖1在PTHrP的刺激下，培養(yǎng)骨髓細(xì)胞6 d，大量破骨細(xì)胞生成（TRAP ×200） 圖2在PTHrP的刺激下，培養(yǎng)骨髓細(xì)胞8 d，骨膜片形成的吸收陷窩（甲苯胺蘭染色 ×200），藍(lán)色為形成的吸收陷窩 圖3在PTHrP的刺激下，加入10-7mol/L的辛伐他汀，掃描電鏡照片見吸收陷窩明顯減少 圖4在PTHrP的刺激下，加入10-6mol/L的辛伐他汀，掃描電鏡照片無吸收陷窩 圖5體外培養(yǎng)第8 d，對(duì)照組小鼠顱蓋骨骨質(zhì)吸收明顯（HE×100） 圖6體外培養(yǎng)第8 d，辛伐他汀10-7 mol/L組，小鼠顱蓋骨較對(duì)組照骨質(zhì)增厚明顯（HE×200）
3 討 論
骨轉(zhuǎn)移癌引起的高血鈣癥（humoral hypercalcemia of malignancy，HHM）與甲狀旁腺功能亢進(jìn)引起的高血鈣癥在臨床癥狀上相似〔4〕。在不同的癌組織都純化出了甲狀旁腺素相關(guān)蛋白（parathyroid hormonerelated protein，PTHrP），被認(rèn)為是介導(dǎo)HHM的主要因子〔5〕，PTHrP具有誘導(dǎo)破骨細(xì)胞形成的能力，從而導(dǎo)致骨吸收破壞，造成HHM。陶惠人和許多榮等〔6、7〕又成功地建立了PTHrP誘導(dǎo)小鼠全脊髓細(xì)胞形成破骨細(xì)胞的培養(yǎng)體系。使破骨細(xì)胞的體外形態(tài)功能及調(diào)控研究成為可能。它排除了體內(nèi)復(fù)雜因素的干擾，研究單一因素對(duì)破骨細(xì)胞的作用，體外將破骨細(xì)胞與骨片共培養(yǎng)可反映破骨細(xì)胞的骨吸收能力，尤其是研究藥物對(duì)破骨細(xì)胞骨吸收的影響，但此方法的缺點(diǎn)在于不能反映出體內(nèi)骨吸收復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控關(guān)系，顱蓋骨保持了原有骨組織細(xì)胞的結(jié)構(gòu)及其相互關(guān)系，具有相對(duì)完整性，有利于觀察培養(yǎng)體系中各細(xì)胞之間的正常關(guān)系、相互影響以及局部環(huán)境的調(diào)節(jié)作用，是研究骨組織代謝的理想模型。
在破骨細(xì)胞吸收的過程中，破骨細(xì)胞首先與骨片緊密結(jié)合，然后細(xì)胞極化形成骨吸收器官，由細(xì)胞內(nèi)的Ⅱ型碳酸酐酶（CAll）將CO2和H2O生成H2CO3，H2CO3分解為H+和CO3-，皺褶緣處的空泡型質(zhì)子泵（VATPase）將H+分泌到骨吸收的微環(huán)境中使骨脫鈣；破骨細(xì)胞吸收骨為游走性的，在一區(qū)域吸收結(jié)束后可游走到其它區(qū)域進(jìn)行骨吸收，從而在骨片上形成一團(tuán)團(tuán)吸收陷窩。因此骨吸收陷窩和游離到培養(yǎng)上清中的鈣是反映破骨細(xì)胞骨吸收能力的的可靠指標(biāo)。本研究結(jié)果表明，辛伐他汀在濃度10-5、10-6、10-7 mol／L時(shí)均使破骨細(xì)胞骨吸收陷窩數(shù)目明顯減少，辛伐他汀在濃度10-5、10-6、10-7 mol／L時(shí)均使破骨細(xì)胞骨形成數(shù)目，明顯減少，培養(yǎng)上清中鈣含量也明顯減少，且呈量效關(guān)系，提示辛伐他汀體外可直接抑制破骨細(xì)胞的形成及其骨吸收功能。
堿性磷酸酶（ALP）是成骨細(xì)胞的特異性標(biāo)志，ALP含量的高低與成骨細(xì)胞的分化密切相關(guān)。小鼠顱蓋骨體外培養(yǎng)第8 d，濃度為10-5、10-6mol/L辛伐他汀培養(yǎng)上清液中ALP的活性明顯增強(qiáng)，組織學(xué)觀察也明顯提示辛伐他汀在濃度10-5、10-6、10-7mol/L時(shí)小鼠頭蓋骨明顯比對(duì)照組骨質(zhì)吸收減輕，骨質(zhì)較致密，礦化增強(qiáng)。這說明辛伐他汀體外既能抑制破骨細(xì)胞的骨吸收又能促進(jìn)成骨細(xì)胞的分化和功能，本實(shí)驗(yàn)中用辛伐他汀各組培養(yǎng)小鼠顱蓋骨的上清中鈣含量與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；可能是由于顱蓋骨培養(yǎng)體系反映的是一個(gè)整體效應(yīng)，不只單純反映破骨細(xì)胞的功能狀態(tài)，所以不如單純成熟破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系那么敏感所致。但從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以可看出，用辛伐他汀各組在濃度10-5、10-6、10-7mol/L時(shí)培養(yǎng)液上清中鈣含量有下降趨勢(shì)，提示在顱蓋骨培養(yǎng)體系中辛伐他汀可抑制破骨細(xì)胞骨吸收活性。
治療骨質(zhì)疏松的藥物二磷酸鹽，由于抑制甲羥戊酸代謝途徑下游產(chǎn)物的生成，是GPT蛋白ras，rho家族活化受阻而具有明顯的抑制破骨細(xì)胞功能的作用〔8〕。在甲羥戊酸代謝途徑中他汀類藥物作為上游途徑中HMGCoA還原酶抑制劑，必將影響其下游產(chǎn)物的生成。因此他汀類藥物在促進(jìn)成骨細(xì)胞活性的同時(shí)，可能對(duì)破骨細(xì)胞也有抑制作用。Grasser WA〔9〕等研究表明洛伐他汀對(duì)體外培養(yǎng)新生大鼠破骨細(xì)胞的形成和分化有著明顯的抑制作用，通過對(duì)甲二羥戊酸在破骨細(xì)胞發(fā)育代謝中作用的研究證實(shí)龍牛兒基龍牛兒醇在破骨細(xì)胞的形成和分化中起著重要的作用，洛伐他汀對(duì)破骨細(xì)胞的抑制作用是通過關(guān)鍵異戊烯化蛋白的二牛龍牛兒基丙酮完成的，并且他汀類藥物的骨效應(yīng)是影響局部破骨細(xì)胞的數(shù)量。Von knoch F等〔10〕人在2005年報(bào)告了大鼠口服120 mgkg-1d-1洛伐他汀可以抑制超高分子量的聚乙烯（UHMWPE）顆粒誘導(dǎo)的大鼠顱骨的骨吸收，并使局部破骨細(xì)胞數(shù)目減少。黃魯豫〔11〕等報(bào)道辛伐他汀在皮下注射10 mg?kg-1?d-1可抑制小鼠頭蓋骨的骨吸收和破骨細(xì)胞的形成。這些觀點(diǎn)和本實(shí)驗(yàn)的結(jié)論是一致的。
本研究采用PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞培養(yǎng)體系和小鼠顱蓋骨培養(yǎng)觀察到，辛伐他汀在體外不僅可促進(jìn)成骨細(xì)胞ALP的表達(dá)，同時(shí)還可以直接抑制PTHrP誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞的形成和功能，對(duì)骨吸收性疾病的防治具有重要意義。
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關(guān)鍵詞 ：信息披露不規(guī)范；中小股東；影響；應(yīng)對(duì)建議
2013 年12 月27 日，國務(wù)院辦公廳了《關(guān)于進(jìn)一步加強(qiáng)資本市場(chǎng)中小投資者合法權(quán)益保護(hù)工作的意見》，文件中重點(diǎn)提出了有關(guān)保護(hù)中小投資者權(quán)益的九個(gè)方面問題，改變了長期以來我國資本市場(chǎng)缺乏專門的制度用來保護(hù)投資者尤其是中小投資者權(quán)益的現(xiàn)狀。另一方面，根據(jù)證監(jiān)會(huì)的2013 年度的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，近年來在滬深交易所開戶的個(gè)人投資者總計(jì)約為9000 萬人，其中50 萬元人民幣以下的投資者完成的交易量大約占股票交易總量的60%。從以上兩則信息中我們不難看出中小股東在我國證券市場(chǎng)的重要地位。然而盡管地位如此，中小股東權(quán)益的保護(hù)現(xiàn)狀卻并不樂觀，尤其是因上市公司信息披露不規(guī)范導(dǎo)致的中小股東利益受損現(xiàn)象仍時(shí)有發(fā)生，加劇了我國金融市場(chǎng)的不穩(wěn)定性。
據(jù)證監(jiān)會(huì)統(tǒng)計(jì)，2011 年中小股東權(quán)益保護(hù)評(píng)價(jià)報(bào)告中，300 家上市公司中小股東權(quán)益保護(hù)評(píng)價(jià)知情權(quán)部分的平均得分為66.25 分，而2010 年這一統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)僅為60.75 分。由此可見，雖然我國上市公司信息披露狀況稍有改善，但是在總體上仍然存在著不少問題。信息披露不規(guī)范的主要表現(xiàn)為信息披露內(nèi)容的不真實(shí)不完整、披露形式的不規(guī)范、披露的及時(shí)性不高等。上述現(xiàn)象對(duì)促進(jìn)上市公司信息對(duì)稱、維護(hù)中小股東權(quán)益有著不利影響，中小股東、企業(yè)和政府監(jiān)管部門應(yīng)分別采用適當(dāng)?shù)姆椒右愿纳啤?/p>
一、信息披露不規(guī)范對(duì)中小股東的影響
（一）信息披露內(nèi)容的不真實(shí)和不完整導(dǎo)致中小股東投機(jī)行為較多
在我國上市公司信息披露過程中，仍存在著部分公司違反信息披露制度的現(xiàn)象，主要表現(xiàn)為：提供虛假信息、隱瞞信息和延遲披露等。例如，創(chuàng)業(yè)板“財(cái)務(wù)造假第一股”的萬福生科，其通過虛構(gòu)合同，甚至虛構(gòu)客戶等手段進(jìn)行財(cái)務(wù)舞弊，導(dǎo)致2012 年、2013 年報(bào)表凈利潤與實(shí)際不符。其在2012年的半年報(bào)中存在虛增營業(yè)收入1.88億、虛增營業(yè)成本1.46億、虛增利潤4023萬，以及未披露公司上半年停產(chǎn)等嚴(yán)重問題，以上違規(guī)行為阻礙了中小投資者理性、客觀的投資，最終使中小股東蒙受損失。
信息披露內(nèi)容的不真實(shí)和不完整，直接導(dǎo)致了上市公司、機(jī)構(gòu)投資者和中小投資者信息之間的不對(duì)稱，這使中小投資者普遍對(duì)長期持有上市公司股票缺乏信心。
由于害怕缺乏有效的信息獲取渠道而導(dǎo)致自身利益受損，中小投資者的基本投資行為通常屬于短期逐利行為或是投機(jī)行為，這一點(diǎn)可以通過滬深兩市較高的換手率發(fā)現(xiàn)———根據(jù)瑞士信貸對(duì)全球股市換手率的計(jì)算，中國2013年股市換手率居于全球第一，超過所有發(fā)達(dá)國家。
（二）部分披露方式?jīng)]有達(dá)到預(yù)期效果
隨著通信技術(shù)的發(fā)展，中小投資者擁有越來越多的途徑了解上市公司各類信息，但數(shù)量并不代表質(zhì)量，部分信息披露方式仍存在著或大或小的問題。如，信息獲取途徑形同虛設(shè)、熱線電話無人接聽、財(cái)務(wù)報(bào)表中的經(jīng)濟(jì)術(shù)語晦澀等。
除法定媒體外，87%的上市公司能夠通過公司主頁中設(shè)置的“投資者關(guān)系管理”板塊與公司的投資者進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)上的互動(dòng)，其中大約有10%的公司還會(huì)定期召開的投資見面會(huì)，多數(shù)公司還開設(shè)了官方微博和微信公眾平臺(tái)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，個(gè)人投資者獲取公司相關(guān)信息的主要渠道按順序依次為門戶網(wǎng)站、公司網(wǎng)站，行情系統(tǒng)、傳統(tǒng)紙質(zhì)媒體和巨潮資訊網(wǎng)，其中互動(dòng)平臺(tái)、微博、微信等新媒體也占有一定比例?？梢?，越來越多的公司通過新興媒體、網(wǎng)絡(luò)等途徑與投資者建立了聯(lián)系。
這些披露方式雖然形式花哨，但起到的實(shí)質(zhì)作用卻有待探討。比如新興媒體消息方面，部分上市公司的網(wǎng)站主頁、各類互動(dòng)平臺(tái)上信息更新頻率小、消息不及時(shí)等問題就制約了這些渠道作用的充分發(fā)揮。
另外，投資者熱線電話方面，一項(xiàng)有關(guān)上市公司投資者熱線電話開設(shè)和運(yùn)行情況的調(diào)查顯示，在被調(diào)查的300 家企業(yè)中，47％(142 家)的上市公司根本沒有設(shè)置可供撥打的投資者熱線電話，25％(75 家)的上市公司雖然設(shè)置、公布了投資者的熱線電話，但是存在上班時(shí)間卻沒有人接聽，形同虛設(shè)的現(xiàn)象，僅僅有28％(83 家)的上市公司設(shè)置的投資者熱線電話能夠保證正常運(yùn)轉(zhuǎn)。
經(jīng)濟(jì)術(shù)語表達(dá)方面，根據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，對(duì)機(jī)構(gòu)和個(gè)人投資者而言，有七成以上的機(jī)構(gòu)和個(gè)人投資者反映上市公司披露信息的部分財(cái)務(wù)、法律、以及專業(yè)技術(shù)等方面的術(shù)語晦澀難懂，理解把握困難。約九成受訪機(jī)構(gòu)、個(gè)人投資者認(rèn)為應(yīng)對(duì)信息披露語言適當(dāng)規(guī)范。那么，對(duì)于經(jīng)濟(jì)知識(shí)基礎(chǔ)較為薄弱的中小投資者來說，難以讀懂的各類報(bào)告無疑成為了其有效獲取信息的障礙之一。
（三）信息披露不及時(shí)使中小股東受損
廣義上看，信息披露不及時(shí)既是指上市公司在證監(jiān)會(huì)規(guī)定的時(shí)間內(nèi)沒有及時(shí)進(jìn)行信息披露的行為，也指上市公司未及時(shí)披露或澄清對(duì)其股價(jià)有重要影響的相關(guān)信息的行為。
寶安公司的石墨礦風(fēng)波就是對(duì)我們一個(gè)很好的警示。2010 年4 月，中國寶安旗下的子公司———貝特瑞公司在自己的官方網(wǎng)站上公開宣稱其擁有近億噸適合于鋰離子二次電池生產(chǎn)使用的優(yōu)質(zhì)石墨礦資源，可以做到穩(wěn)定持續(xù)的供給原料。并且與此同時(shí)湘財(cái)證券、平安證券、國泰君安證券和信達(dá)證券四家券商，從2010 年9 月到2011年2 月期間也都分別在其各自的出具研究報(bào)告中或多或少的都傳遞出“建議投資人買入”的信息。由于參考了以上消息，不少投資者購買了中國寶安公司的股票。但是在2011 年2 月，中國寶安出面答復(fù)投資者疑問時(shí)卻給出了截然相反的另一種說法：公司在雞西地區(qū)建有石墨產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)園區(qū)，主要從事石墨等材料的深加工，但是目前雞西園區(qū)內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)石墨礦的存在。消息一出，寶安股價(jià)大跌，上述投資者紛紛遭受重創(chuàng)。
中國寶安的股價(jià)的漲跌與其是否擁有石墨礦資源有直接關(guān)聯(lián)。在寶安此次的股價(jià)起落過程中基金投資者紛紛都于股價(jià)高位撤出，而與此形成鮮明對(duì)比的是，信息不對(duì)稱的中小股民、投資者則是紛紛被套牢或者不得不虧損售出。2010 年至2011 年一季報(bào)之間，曾經(jīng)擁有寶安石墨眾多股權(quán)的八家基金紛紛大量拋售。截止到2011 年度第一季度季報(bào)報(bào)，2011 年第一季度季報(bào)較2010 年的年報(bào)來看，十大流通股股東總計(jì)持股數(shù)減少了40047202 股，持股比例占總股本的比例也相應(yīng)的減少了3.68%。由此可見，上市公司信息披露不及時(shí)對(duì)投資者尤其是中小投資者的影響之大。
二、減小信息披露不規(guī)范對(duì)中小股東影響的建議
（一）少一些投機(jī)心理，多一些理性思考
從中小投資者自身來說，中小投資者應(yīng)牢記“股市有風(fēng)險(xiǎn)，入市須謹(jǐn)慎”的原則，提高分辨能力、甄別信息真假。中小投資者在投資時(shí)應(yīng)先對(duì)上市公司進(jìn)行充分調(diào)查，獲取多方信息，對(duì)上市公司有客觀全面的了解。中小投資者可以適當(dāng)參照證券商的調(diào)研報(bào)告，但也不能全盤接受、盲目聽信，還要在其的調(diào)研報(bào)告的基礎(chǔ)上去更加深入的了解上市公司的公告，并反復(fù)、多方面的確認(rèn)信息的全面、真實(shí)和可靠性。
另外還應(yīng)引起中小投資者關(guān)注的是，我們?cè)谕顿Y股票時(shí)，也應(yīng)適當(dāng)?shù)年P(guān)注那些同樣持有該股票的機(jī)構(gòu)投資者的下一步動(dòng)向。由于機(jī)構(gòu)投資者持有該股票的大多數(shù)股份，所以其每一個(gè)動(dòng)作都很有可能引起股價(jià)的波動(dòng)。總之，中小投資人需要的不僅是一個(gè)擁有健康透明管理機(jī)制的股票市場(chǎng)，中小投資人自身還需要樹立正確合理的價(jià)值投資的理念。這不僅需要政府監(jiān)管機(jī)構(gòu)大力加強(qiáng)監(jiān)管的，需要上市公司和其他機(jī)構(gòu)的大力配合，而且更加需要中小投資人從自身的立場(chǎng)出發(fā)理性思考。
（二）提供“易懂易得”的信息
從上市公司角度看，為全面保護(hù)中小投資者權(quán)益，應(yīng)著力避免因信息誤讀誤解、獲取失敗而影響中小股東利益情況的發(fā)生。因此，建議上市公司從信息披露內(nèi)容的表達(dá)語言和披露方式上加以改進(jìn)。具體看，在表達(dá)語言上可以更加通俗易懂、言簡意賅，披露方式上更加公平、易得?！耙锥椎谩睉?yīng)為上市公司信息披露的基本目標(biāo)。上市公司有責(zé)任使本公司對(duì)外公布的信息通俗易懂、獲取方式便捷，真正兼顧各類投資者理解能力與信息獲取能力。
處于互聯(lián)網(wǎng)金融時(shí)代的當(dāng)今社會(huì)，以努力促進(jìn)信息獲取途徑的公平性、確保中小投資者能夠從繁雜甚至矛盾的信息中快速提取有效信息為最終目標(biāo)，上市公司應(yīng)當(dāng)充分發(fā)揮現(xiàn)有的信息披露系統(tǒng)和互動(dòng)平臺(tái)的基礎(chǔ)性作用，努力促進(jìn)法定和非法定披露平臺(tái)相結(jié)合。上市公司還應(yīng)當(dāng)不斷完善以網(wǎng)頁、鏈接或客戶端等多種形式存在的專用信息系統(tǒng)，并且應(yīng)把信息披露部分重點(diǎn)、專門納入專用信息系統(tǒng)，這一專用信息系統(tǒng)還應(yīng)當(dāng)囊括公司網(wǎng)站相關(guān)信息、各類媒體報(bào)道和微博、微信公眾平臺(tái)信息及簡、詳版的公告，還可以加入上市公司與中小投資者的互動(dòng)答疑、中小投資者自身的調(diào)研記錄以及網(wǎng)絡(luò)投票等多方面的信息。此外，建立系統(tǒng)內(nèi)地圖導(dǎo)航，按照重要風(fēng)險(xiǎn)提示、經(jīng)營業(yè)績等信息要素，將公開報(bào)告各章內(nèi)容和臨時(shí)報(bào)告進(jìn)行整歸納整合，這樣不僅便于中小投資者閱讀比對(duì)，還有利于引導(dǎo)其分類提問。
（三）事前提醒，事后懲罰
從政府監(jiān)管部門看，針對(duì)上市公司有時(shí)會(huì)出現(xiàn)信息披露不及時(shí)的現(xiàn)狀，當(dāng)企業(yè)無法對(duì)及時(shí)公開信息進(jìn)行自我監(jiān)督時(shí)，監(jiān)督和處分兩種手段毋庸置疑的必須充分發(fā)揮規(guī)范信息披露的作用。在事前提醒方面，政府相關(guān)部門可以在企業(yè)信息披露的截止時(shí)限前一月，提前提醒企業(yè)及時(shí)公布信息；也可以將上一年度因信息披露不及時(shí)受到處罰的企業(yè)名單及具體懲罰措施公開，起到警示作用。另外，提醒公司及時(shí)公布信息也是與上市公司合作的會(huì)計(jì)師事務(wù)所的義務(wù)之一。事后懲罰方面，證監(jiān)會(huì)和證券交易所應(yīng)加強(qiáng)懲罰力度，對(duì)信息披露不及時(shí)的行為依法進(jìn)行嚴(yán)懲，絕不姑息放縱，嚴(yán)格監(jiān)管各上市公司信息披露及時(shí)、有效性，為中小投資者的合法利益保駕護(hù)航。
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[中圖分類號(hào)] R743.34 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2012）10（b）-0040-02
腦出血是高血壓較為嚴(yán)重的并發(fā)癥，是高血壓致殘、致死的重要原因。手術(shù)治療是治療高血壓腦出血的重要方法，但傳統(tǒng)開顱術(shù)手術(shù)時(shí)間長、對(duì)腦組織損害大且術(shù)后并發(fā)癥多。隨著外科微創(chuàng)技術(shù)的迅猛發(fā)展，微創(chuàng)手術(shù)逐漸被廣泛地應(yīng)用到臨床實(shí)踐當(dāng)中，小骨窗微創(chuàng)開顱治療腦出血具有創(chuàng)傷小、血腫清除徹底、傷口愈合快、操作簡便、費(fèi)用低廉等優(yōu)點(diǎn)[1]受到患者的歡迎。為探討小骨窗治療高血壓腦出血的療效，現(xiàn)回顧性分析我院60例采用手術(shù)治療的高血壓腦出血患者的生活質(zhì)量，報(bào)道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
選擇我院2011年1月～2012年1月收治的高血壓腦出血患者60例，所有病例均符合第四屆全國腦血管病學(xué)術(shù)會(huì)議制訂的《高血壓性腦出血診斷標(biāo)準(zhǔn)》，行頭顱CT檢查明確出血部位。均簽署知情同意書，排除嚴(yán)重的心、肝、腎、腦干功能衰竭，顱內(nèi)及全身感染及有凝血功能障礙者，排除動(dòng)脈瘤、動(dòng)靜脈畸形、腦干出血及血腫累及腦干的患者。其中，男36例，女24例；年齡40～76歲，平均62.5歲；發(fā)病時(shí)間< 72 h；格拉斯哥（GCS）評(píng)分≥ 6分；出血量35～90 mL，平均（55.8±14.2）mL。出血部位：皮層下8例，殼核37例，丘腦12例，小腦出血3例；有21例患者出血破入腦室。臨床表現(xiàn)為突發(fā)意識(shí)不清、神志朦朧、語言不利、嗜睡、嘔吐。將全部60例患者按治療方式不同分為觀察組和對(duì)照組，每組各30例，兩組患者在一般資料及病情等方面比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。
1.2 治療方法
1.2.1 對(duì)照組 采用傳統(tǒng)開顱手術(shù)治療，手術(shù)切口中心點(diǎn)選在最小接近顱骨距離和最大出血面積的CT層面。全麻下，行前弧形切口或者是馬蹄形切口，按常規(guī)術(shù)式完成手術(shù)。若出血量多，則給予患者電凝處理，或者行骨瓣減壓。
1.2.2 觀察組 采用小骨窗微創(chuàng)開顱術(shù)治療，以CT影像血腫做大層面中心為靶點(diǎn)，采用標(biāo)尺定位，避開皮層大血管及重要功能區(qū)。在距血腫最近的體表處做縱形直切口，直達(dá)顱骨。顱骨鉆孔切開頭皮，顱骨鉆孔后用咬骨鉗擴(kuò)大骨窗約3 cm×3 cm，十字切開硬腦膜并懸吊，于無血管區(qū)與非功能區(qū)切開腦皮質(zhì)，沿穿刺通道方向以吸引器將血腫輕柔吸出，以生理鹽水反復(fù)沖洗血腫腔，不斷調(diào)整顯微鏡視角和患者的頭位，有活動(dòng)出血可電凝。通道用棉片保護(hù)，血腫清除過程中盡量避免對(duì)腦組織的牽拉。置硅膠引流管1根，敞開硬膜。關(guān)閉切口。若血腫腔中血凝塊較多，切忌強(qiáng)行抽吸，避免再次出血，術(shù)后首次以尿激酶2萬～5萬U溶于2 mL生理鹽水注入血腫腔內(nèi)，夾管30 min后開放，引流管留置時(shí)間一般為24～72 h，復(fù)查CT血腫基本小時(shí)候拔出引流管。
1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)
比較兩組患者的手術(shù)時(shí)間、殘留血腫量、術(shù)后7 d的GCS評(píng)分、療效、再出血率、生活能力及神經(jīng)功能缺損。其中①殘留血腫量：手術(shù)后20 h頭顱CT掃描統(tǒng)計(jì)各組殘留血腫量。②療效：兩組患者均隨訪3～6個(gè)月，根據(jù)格拉斯哥預(yù)后評(píng)分（GOS）轉(zhuǎn)歸標(biāo)準(zhǔn)分為良好、中殘、重殘、植物生存和死亡。③生活能力及神經(jīng)功能缺損情況：采用Barthel指數(shù)評(píng)定日常生活能力，采用斯堪的那維亞神經(jīng)卒中量表評(píng)分（SSS）評(píng)價(jià)神經(jīng)功能缺損情況[2]。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 兩組患者殘留血腫量、手術(shù)時(shí)間、術(shù)后7 d GCS評(píng)分、GOS良好率比較
兩組患者的殘留血腫量、術(shù)后7 d的GCS評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），觀察組的手術(shù)時(shí)間及GOS良好率優(yōu)于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。
2.2 兩組患者預(yù)后情況比較
觀察組治療后再出血率顯著低于對(duì)照組，神經(jīng)功能缺損情況、日常生活能力均顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05）。見表2。
3 討論
出血量和出血部位是高血壓腦出血患者致殘和致死的決定因素，有效清除血腫是治療高血壓腦出血的關(guān)鍵[3-4]。目前對(duì)高血壓手術(shù)治療方法很多，主要方式有傳統(tǒng)大骨瓣開顱術(shù)、小骨窗開顱術(shù)、立體血腫抽吸術(shù)等，但尚缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。以往常采用開顱血腫清除術(shù)，但手術(shù)創(chuàng)傷大，容易引起多系統(tǒng)臟器的合并癥，病死率高。小骨窗開顱術(shù)以最微小的損傷和最快的速度清除血腫，體現(xiàn)了現(xiàn)代顯微神經(jīng)外科治療高血壓腦出血的理念，目前已經(jīng)有逐漸取代傳統(tǒng)大骨瓣開顱術(shù)的趨勢(shì)。本研究采用小骨窗微創(chuàng)開顱治療高血壓腦出血具有以下幾個(gè)方面的優(yōu)點(diǎn)：①局麻下手術(shù)，對(duì)不配合的患者加基礎(chǔ)麻醉，簡單快捷，手術(shù)時(shí)間短；②術(shù)野清晰，能在直視下清除血腫和止血，避開了重要功能區(qū)和主要大血管，清除血腫占位對(duì)腦組織的直接機(jī)械損傷（原發(fā)性損傷），術(shù)后很少遺留神經(jīng)功能障礙，且不易感染、不滲漏；③手術(shù)創(chuàng)傷小，對(duì)腦組織的人為損傷減小，術(shù)中出血少，術(shù)后恢復(fù)快，腦組織水腫輕；④盡早及最大限度清除腦內(nèi)血腫凝結(jié)過程中釋放的物質(zhì)及血塊液化過程中分解產(chǎn)物，可完全達(dá)到傳統(tǒng)骨瓣開顱清除血腫的要求；⑤止血確切，減壓充分，有效地減輕腦水腫，使受壓的神經(jīng)元盡可能恢復(fù)功能，可預(yù)防血管損傷和繼發(fā)性腦損害，減輕血腫釋放物對(duì)周圍腦組織的損傷[5-6]。
本研究結(jié)果顯示，兩組患者的殘留血腫量、術(shù)后7 d的GCS評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），但觀察組手術(shù)時(shí)間及GOS良好率均顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），這提示小骨窗手術(shù)僅縮短手術(shù)時(shí)間，減少腦暴露，而且殘留血腫不多，療效滿意。結(jié)果還顯示，觀察組患者再出血情況、神經(jīng)功能缺損情況、日常生活能力均顯著優(yōu)于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P < 0.05），這提示小骨窗手術(shù)的預(yù)后良好。
綜上所述，小骨窗微創(chuàng)開顱治療高血壓腦出血具有微創(chuàng)的優(yōu)勢(shì)，是一安全、高效的手術(shù)方法，可顯著提高療效、改善患者的預(yù)后。
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關(guān)鍵詞： 斷路器；聲波；小波包；奇異譜熵；支持向量機(jī)
Key words: circuit breaker；acoustic signal；wavelet packet；singular spectrum entropy；support vector machines(SVM)
中圖分類號(hào)：TM561 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1006-4311（2012）25-0028-03
1 斷路器操動(dòng)過程中的聲波信號(hào)
斷路器在分、合閘過程中由于機(jī)械的撞擊和摩擦發(fā)出的聲波中蘊(yùn)含了豐富的機(jī)械狀態(tài)信息。聲波傳感器的安裝相對(duì)靈活簡便，不需要改變?cè)O(shè)備結(jié)構(gòu)，所以與其它檢測(cè)法相比，聲學(xué)檢測(cè)具有簡單靈活、易于在線檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)。但在獲得的聲波信號(hào)中常常含有大量噪聲，嚴(yán)重影響了信號(hào)處理結(jié)果。采用電容型傳聲器采集斷路器合閘的聲波信號(hào)，采樣頻率為10000Hz，采樣點(diǎn)30000個(gè)，如圖1所示。由圖2可以發(fā)現(xiàn)合閘聲波信號(hào)能量主要分布在0～3000Hz，3000Hz以上信號(hào)能量很小。
2 小波包奇異譜特征向量提取方法
2.1 選擇合適的小波包基函數(shù)和分解層數(shù)，對(duì)聲波信號(hào)進(jìn)行分解。定義P■■為第j層上小波包分解的第i個(gè)量，則可以得到小波包分解的Mallat算法：
P■■（k）=HP■■（k）P■■（k）=GP■■（k）（1）
其中H和G分別為低通濾波器和高頻濾波器。原始信號(hào)經(jīng)j層小波包分解得到2j段信號(hào)，每段信號(hào)含有信號(hào)采樣點(diǎn)數(shù)為■。當(dāng)經(jīng)過j層分解后，第j層上的第i個(gè)節(jié)點(diǎn)系數(shù)為：P■■=P■■（k），k=1，2，…，N/2j。
2.2 對(duì)小波包分解后各節(jié)點(diǎn)系數(shù)進(jìn)行重構(gòu)和提取，重構(gòu)公式為：P■■（k）=H*P■■（k）+G*P■■（k）（2）
式中H*和G*是H和G的對(duì)偶算子。
2.3 對(duì)經(jīng)過j層小波包分解之后各節(jié)點(diǎn)重構(gòu)信號(hào)進(jìn)行相空間重構(gòu)。以長度為L步長為1將節(jié)點(diǎn)系數(shù)P■■加窗，并映射到嵌入空間中，即將該系數(shù)序列分為■-L+1個(gè)數(shù)據(jù)段，構(gòu)造相空間狀態(tài)矩陣A■■
A■■=■ （3）
2.4 在計(jì)算得到各節(jié)點(diǎn)系數(shù)相空間重構(gòu)特征矩陣后再將A■■進(jìn)行奇異值分解（SVD），計(jì)算熵特征向量。A■=U■?撰■V■■，得到?撰■非零對(duì)角元?姿■■（k=1，2，…，n）（n=min（（2■N-L+1），L）），則?姿■■構(gòu)成該層上信號(hào)的奇異值譜。若k0為非零奇異值個(gè)數(shù)，則k0值反映了特征矩陣A包含不同模式個(gè)數(shù)，奇異值大小反映對(duì)應(yīng)模式在總模式中所占比重大小?；谛畔㈧乩碚?，該信號(hào)的奇異譜熵為：
H■■=-■p■■1np■■
p■■=■（4）
3 故障診斷方法
故鄉(xiāng)靜默在云貴高原的東北面，像一尊千古不化的石雕，守護(hù)著這片安詳?shù)臉吠痢?/p>
十七歲畢業(yè)，十八歲離家外出游學(xué)，至今已有整整七年。坐在湘西的烏篷船上，故鄉(xiāng)的路，越發(fā)使我覺得親切而遙遠(yuǎn)。
高原多山少水。因此，自小便對(duì)那浩瀚無邊的水域有著神秘而無法言說的渴望。也是因?yàn)檫@般緣故，外出游學(xué)時(shí)，便鐵定了心要往祖國的東面跑。目的，也不過是為了看看那些波濤奔涌的大海。
不見時(shí)覺得神秘，見了，反倒感念起故鄉(xiāng)的好來。每每想起故鄉(xiāng)，首先在腦海中浮現(xiàn)的，便是那蜿蜒曲折的樹間小路。
小路兩旁的樹木終年互擁，葳蕤常綠，把空氣都籠罩得越發(fā)清涼。那透骨的涼意，即便在三伏烈夏，也絲毫不減。
中學(xué)時(shí)，母親常常站在這條鋪滿青苔的小路上等我。她晃著臃腫的身子，騎著一輛叮叮當(dāng)當(dāng)?shù)娜嗆?，立在斑駁的夕陽中，一動(dòng)不動(dòng)地看著來路。
可惜，那時(shí)年少輕狂的我，并不曾覺察到她的真正用意。
很多時(shí)候，我都是騎著那輛火紅色的牛頭賽車，急急奔入她的眼簾，而后，未等她眼中的欣喜全然退卻，又急急地消失于她的視線。
她極少喊我。任憑我載著青春的叛逆與張狂，拋下她，大步流星地朝前而去。
許多年后，坐在湘西的烏篷船上，想起故鄉(xiāng)的路，才忽然想起她的艱難。那時(shí)父親剛走，生活所有的重?fù)?dān)都?jí)涸谒募缟??？僧吘梗莻€(gè)婦道人家。而南陲邊塞，又多有鬼怪神異的傳聞。夕陽晚照，夜幕即臨，她自是不敢獨(dú)回，才在那條必經(jīng)的小路上等我。
可誰能料到？她的大兒子并不能領(lǐng)會(huì)她的用意，竟將孤身無助的她遙遙地拋在樹林間的夕陽小路上。
外出游學(xué)之后，每年春節(jié)回家，她還是會(huì)在那條熟悉的小路上等我。仍舊騎著破舊的三輪車，仍舊一動(dòng)不動(dòng)，仍舊靜默得如同一尊泥塑。
只是，這時(shí)的我已然懂了。我會(huì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)地，喊她一聲，而后，飛快地奔至她的跟前，讓她仔細(xì)地看看我，摸摸我。她知道，她拗不過我的倔犟，只好慢悠悠地爬進(jìn)后車兜里，讓我把她載回家。
偶爾，她的眼中會(huì)泛出一道晶亮的光。我不忍看，只好牢牢凝視前方這條長滿青苔的小路。
